漸危藥用植物黃檗產活性成分內生真菌的初步研究.pdf

1、本文選用珍稀藥用植物黃檗，采用常規(guī)的內生真菌分離方法，從其中分離出了13種內生真菌，并以此為對象進行以下研究工作。 結合內生真菌的生長曲線，檢測生物堿的沉淀反應和鹽酸小檗堿的特異性反應，對所得菌株進行初篩得到S6和L2可能產小檗堿；通過擴大培養(yǎng)，利用薄層層析(TLC)進行復篩，得到一株產小檗堿的內生真菌菌株S6；對S6發(fā)酵培養(yǎng)物中有效成分的提取過程進行了摸索。 通過對S6的擴大培養(yǎng)，對提取物的TLC進行薄層掃描，發(fā)現(xiàn)提取

2、物的吸收曲線與標準品的吸收曲線近似；提取物的紅外光譜檢測(IR)和核磁共振(NMR)的氫譜檢測結果顯示：S6培養(yǎng)液提取物的圖譜中含有標準品圖譜中比較多的基團和鍵。據(jù)此判斷，所得到的S6提取物應為鹽酸小檗堿。 通過對不同固體培養(yǎng)基中菌絲的生長速率和長勢分析，篩選出實驗室中適合S6菌株生長的固體培養(yǎng)基；通過對不同液體培養(yǎng)基中S6的生物量和代謝產物產生量的對比，篩選出適合S6菌絲生長及產生物堿的液體培養(yǎng)基；利用最適液體培養(yǎng)基對其中的碳

3、源、氮源、pH和最適溫度進行了篩選，結果顯示，麥芽糖，尿素，pH7.0和發(fā)酵溫度28℃分別是相應的最佳條件。 采用L16(43)正交實驗，進一步優(yōu)化了菌株S6的發(fā)酵條件，得出最佳初始培養(yǎng)條件為：麥芽糖15g.L-1，尿素4.3g.L-1，pH7.0左右，裝液量150mL/300mL，培養(yǎng)溫度28℃，此配比也可做為菌株S6實驗室的液體種子培養(yǎng)基的配比；次生代謝產物積累時的適宜發(fā)酵條件為：麥芽糖15g.L-1，尿素5.3g.L-1,