芹菜葉酚類物質的分離純化、鑒定及抗氧化活性研究.pdf

1、芹菜是一種二年生的傘型花科草本植物，具有抗氧化、抗癌、抗炎、降血壓、降血脂、鎮(zhèn)痛等作用，其中，抗氧化活性是眾多生物活性的基礎。芹菜中的酚類化合物是發(fā)揮上述功效的重要成分，其中芹菜葉是酚類物質含量最多的一個部位。然而，目前對芹菜酚類物質的研究主要集中在粗提物或芹菜素等個別單體的活性上，針對芹菜中主要酚類物質的分離純化、結構鑒定研究報道較少，對芹菜酚類單體種類的研究不夠徹底，無法全面闡述單體物質在抗氧化活性中發(fā)揮的作用以及構效關系。因此，本

2、研究以芹菜葉為原料，采用柱層析、制備型高效液相色譜對芹菜葉醇提物進行分離純化，制備出高純度芹菜葉酚類單體化合物;通過多種儀器分析手段對芹菜葉酚類單體化合物的結構進行解析;最后通過化學抗氧化試驗和肝癌細胞抗氧化試驗，對芹菜葉酚類物質的抗氧化活性進行研究，篩選出具有高抗氧化活性的成分，并探究芹菜葉酚類物質抗氧化能力與結構之間的關系，闡明芹菜葉各酚類單體化合物在抗氧化中發(fā)揮的作用，結果如下:
　　(1)通過高效液相色譜(HPLC)測定芹

3、菜葉酚類物質粗提液，分析芹菜葉中主要存在17種酚類化合物。然后，采用D101大孔樹脂、制備型高效液相、Sephadex LH-20葡聚糖凝膠色譜對芹菜葉粗提物進行分離純化與制備，共獲得14種單體，HPLC檢測純度均大于96％。
　　(2)通過液相色譜-電噴霧離子阱串聯(lián)質譜(HPLC-ESI-MS/MS)、紫外光譜(UV)、紅外光譜（IR）和核磁共振技術(NMR)對芹菜葉酚類提取液與制備分離組分進行物質結構鑒定，共鑒定出17種化合物

4、，分別為:綠原酸、對香豆奎寧酸、木犀草素-7-O-葡萄糖-2-O-芹糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、芹菜苷、3’-甲氧基芹菜苷、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、6-丙二?；?木犀草素-7-O-葡萄糖-2-O-芹糖苷、柯伊利素-7-O-葡萄糖苷、6-丙二?；?木犀草素-7-O-葡萄糖苷、6-丙二?；鄄塑铡?-丙二?；?柯伊利素-7-O-葡萄糖-2-O-芹糖苷、6-丙二?；?芹菜素-7-O-葡萄糖苷、6-丙二酰基-柯伊利素-7-O-葡萄糖苷、

5、木犀草素、芹菜素、柯伊利素。芹菜葉的酚類成分主要為芹菜素、木犀草素、柯伊利素及它們的衍生物以及一些酚酸類物質。
　　(3)通過化學抗氧化試驗(DPPH、ABTS、ORAC)與細胞抗氧化(CAA)試驗對芹菜葉酚類物質的抗氧化活性進行研究。四種方法結果表明木犀草素、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖-2-O-芹糖苷、6-丙二?；?木犀草素-7-O-葡萄糖苷均具有較高的抗氧化活性，并存在一定的量效關系;綠原酸、芹菜素、

6、柯伊利素及其衍生物在體外抗氧化實驗中表現(xiàn)出較好的抗氧化能力，但細胞抗氧化能力較低;DPPH和ABTS法的試驗結果均表明，B環(huán)具有3'，4'-鄰二羥基的木犀草素的抗氧化活性顯著高于僅含4'-OH的芹菜素(P＜0.05)，A環(huán)O-連黃酮苷的抗氧化性低于其苷元，而ORAC法則顯示出芹菜素的抗氧化活性顯著高于木犀草素(P＜0.05);CAA法結果顯示，當C環(huán)無羥基時，B環(huán)只有一個4'-OH的芹菜素及其黃酮苷無細胞抗氧化活性，但B環(huán)有兩個羥基的木