中國被毛孢胞內(nèi)多糖(HSIPS2)分離純化、抗氧化活性及結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、中國被毛孢（Hirsutella sinensis）是從天然蟲草中分離得到的蟲草菌之一，具有與天然蟲草相似的生物活性功能，為我國現(xiàn)代中醫(yī)藥和保健食品的開發(fā)提供新的重要原料。而多糖是中國被毛孢的主要活性成分之一，具有很好的藥理活性，擁有非常好的應(yīng)用價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)在培養(yǎng)基中添加陳皮水提物對中國被毛孢菌株(HS001)進(jìn)行發(fā)酵，以得到的中國被毛孢發(fā)酵菌絲體為原料，通過分離純化得到一種新型的胞內(nèi)多糖，進(jìn)一步研究表明中國被毛孢胞內(nèi)多糖具有較高的體外

2、抗氧化活性，并首次對其化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。主要研究過程及結(jié)果如下：
　　1、中國被毛孢胞內(nèi)多糖的分離純化及抗氧化活性研究。(1)在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加陳皮水提物對中國被毛孢菌株(HS001)進(jìn)行發(fā)酵得到中國被毛孢菌絲體。中國被毛孢發(fā)酵菌絲體經(jīng)過熱水浸提、醇沉后得到胞內(nèi)粗多糖，得率為4.6％;粗多糖進(jìn)一步脫蛋白、脫色素、過DEAE-Sepharose Fast Flow離子交換柱色譜和Sephacryl S-100凝膠柱色譜分離得到均一性

3、多糖組分(HSIPS2)。(2)采用靜態(tài)光散射與排阻色譜聯(lián)用方法(SEC-MALLS)以及高效液相色譜(HPLC)法測定分析中國被毛孢胞內(nèi)多糖分子信息以及單糖組成。發(fā)現(xiàn)HSIPS2的分子量Mw=1.463×104 g/mol，純度達(dá)到99.82％，是一個(gè)低分散度、均一性的純多糖。此外，激光光散射儀測得HSIPS2多糖的均方旋轉(zhuǎn)半徑＜S2＞z1/2為0.5 nm，流體力學(xué)半徑Rh=2.3 nm; HPLC法測得HSIPS2的單糖組成及摩爾

4、比為:葡萄糖∶半乳糖∶甘露糖∶核糖=48.52∶6.58∶5.17∶1.0，確定HSIPS2是一種新型多糖。(3)體外抗氧化活性分析得知，HSIPS2多糖具有較高的抗氧化活性。HSIPS2的ORAC值為872.80μmol TE/g;在1.0 mg/mL時(shí)，HSIPS2還原能力為0.99;此外，HSIPS2對DPPH自由基清除率、羥自由基清除率以及ABTS自由基清除率的IC50值分別為0.73 mg/mL、0.75 mg/mL和0.47

5、 mg/mL。
　　2、首次深入地對中國被毛孢胞內(nèi)多糖HSIPS2結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究。(1)經(jīng)過紅外光譜(IR)、甲基化分析以及核磁(NMR)分析發(fā)現(xiàn)，HSIPS2多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)主要是以1，4糖苷鍵連接為主鏈的α-葡萄糖吡喃型殘基，支鏈為O-6位被端基α-Glcp-(1→所取代的1，5糖苷鍵連接的β-半乳糖呋喃型殘基，且支鏈通過O-6位與主鏈相連，此外還有少量的1，3糖苷鍵連接的α-呋喃型核糖、1，4糖苷鍵連接的α-吡喃型甘露糖和1，2

6、糖苷鍵連接的吡喃型半乳糖。(2)通過SEC-MALLS-IR-ViscoStarⅡ聯(lián)用和AFM觀測研究HSIPS2多糖的構(gòu)象，得到α為0.67，v為0.56，ML=334.05 nm-1，q=0.70 nm，d=0.69 nm，表明HSIPS2多糖在0.1 mol/L NaNO3溶液中的構(gòu)象為柔順鏈。此外，HSIPS2多糖在溶液中的鏈構(gòu)象經(jīng)原子力顯微鏡(AFM)觀測得到了進(jìn)一步證明。本研究為闡明HSIPS2多糖的構(gòu)效關(guān)系提供了理論基礎(chǔ)。