海洋真菌胞外多糖的結(jié)構(gòu)及抗氧化活性研究.pdf

1、海洋中蘊(yùn)藏著豐富的微生物資源，紅樹林生態(tài)系統(tǒng)和江河入?？谖挥诤Ｑ笈c陸地交界的特殊環(huán)境，其微生物種類及其產(chǎn)物也具有自己的特色。本文從五株不同來源海洋真菌的發(fā)酵液中提取胞外粗多糖，經(jīng)分離純化得到純品多糖，并對所得的多糖組分進(jìn)行化學(xué)組成、結(jié)構(gòu)和抗氧化活性的研究。研究結(jié)果如下：
　　1.從老鼠簕枝葉內(nèi)生土曲霉菌Aspergillus.terreus W-8，海芒果根泥來源真菌黃柄曲霉Aspergillus flavipes ZHN1-09

2、和海桑深層根泥真菌PJX-2的發(fā)酵液中分別提取得到三個胞外粗多糖LN,LD和PJX，利用Q-Sepharose Fast Flow離子交換層析，Surperdex-75和Sephacryl S-100凝膠滲透層析分離純化得到五個多糖組分lnw-c,ds2-2,ds4-1,jxw-2和jxs-2。經(jīng)柱前衍生高效液相色譜（PMP-HPLC）和高效凝膠滲透色譜法（HPGPC）分析表明，lnw-c中含有約2:1:1的GlcN，Man和Glc，為

3、堿性多糖，ds2-2,ds4-1,jxw-2和jxs-2均含有高比例的Man。jxw-2和jxs-2為中性多糖，純度均達(dá)到90％以上，分子量分別為5.6和9.7 kDa。紅外光譜和甲基化分析表明，jxw-2，jxs-2和ds2-2均以Man(1→，→2)Man(1→，→6)Man(1→和→2,6)Man(1→四種連接方式為主，且jxs-2具有β-型糖苷鍵構(gòu)型；lnw-c除甘露糖的連接片段外，還含有→6)Glc(1→和→2,6)Glc(1

4、→的連接片段。
　　2.從黃河三角洲水域梭魚的內(nèi)臟共附生土曲霉Aspergillus terreus OUCMDZ-1925的發(fā)酵液中提取多糖，經(jīng)Q-Sepharose Fast Flow離子交換層析和Sephacryl S-100凝膠滲透層析分離純化得到兩個多糖組分yw-2和yss?；瘜W(xué)和HPGPC分析表明，yss純度達(dá)到94.04%，分子量為18.6kDa。PMP-HPLC分析表明，yss由Man和Gal以7.70:1.00的

5、比例構(gòu)成。紅外光譜、甲基化、一維，二維核磁共振波譜（1D,2D NMR）分析表明，yss為分支度較高的中性雜多糖，其主鏈主要含有→2)-α-D-Manp(1→和少量→6)-α-D-Manp(1→，支鏈位于→2)-α-D-Manp(1→的C-6，分支由→1)-α-D-Manp(6→1)-α-D-Manp和β-D-Galf(1→組成。該研究首次從梭魚內(nèi)臟真菌土曲霉Aspergillus terreus發(fā)酵液中分離得到結(jié)構(gòu)新穎的以→2)-α-

6、D-Manp(1→和→6)-α-D-Manp(1→為主鏈的半乳葡聚糖，表明海洋共附生真菌是結(jié)構(gòu)新穎的胞外多糖的重要來源。
　　3.從海南文昌紅樹林根泥共附生青霉菌Penicillium sp.H-25-02中分離得到粗多糖YQ，利用Q-Sepharose Fast Flow離子交換層析和Sephacryl S-100凝膠滲透層析純化得到qw-2,qs1-1,qs-2s和qs-3a四個多糖組分?；瘜W(xué)和HPGPC分析表明，所有多糖組分

7、的糖含量均高于89%，qw-2,qs1-1,qs-2s和qs-3a的分子量分別為12.22,16.17,20.96和22.87kDa。PMP-HPLC分析表明，四種多糖均以Man為主，且qs1-1,qs-2s和qs-3a中含有少量的GalA,為酸性多糖。紅外光譜和甲基化分析表明，四種多糖的結(jié)構(gòu)連接方式多樣，其中qs-2s和qs-3a中均具有少見的→6)Galf(1→，為結(jié)構(gòu)新穎的胞外多糖。對qs-2s進(jìn)行部分酸水解研究表明，其結(jié)構(gòu)中的→

8、6)Galf(1→和Galf(1→均位于側(cè)鏈部分。
　　4.以體外DPPH自由基，超氧陰離子自由基和羥基自由基清除活力為評價指標(biāo)，研究了上述多糖的抗氧化活性。結(jié)果表明，所有多糖均表現(xiàn)出一定的抗氧化活性；多糖樣品在0~8.0mg/mL時，對自由基的清除均呈現(xiàn)濃度依賴性；多糖組分qs-2s，qs-3a，yss和ds4-1清除DPPH自由基的EC50值分別為3.5,5.0,2.8和1.0mg/mL；qs-2s,yss和jxs-2的清除羥