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文檔簡介
1、本文從2株海洋微生物在6種不同培養(yǎng)基中的發(fā)酵液中提取得到12種胞外粗多糖,在對其進(jìn)行基本理化性質(zhì)分析基礎(chǔ)上,進(jìn)一步對其免疫活性進(jìn)行了研究。主要研究結(jié)果如下:
1.在12種胞外粗多糖中,AF3、AF2、SEK1及SEK3多糖得率較高,分別為10.1%,9.7%,8.0%及7.9%。運用高效液相色譜法(HPLC)、紅外光譜(IR)、高效凝膠滲透色譜法(HPGPC)等方法對所有胞外粗多糖的單糖組成、官能團(tuán)性質(zhì)及分子量等進(jìn)行了分析比較
2、。結(jié)果表明12種胞外粗多糖均不含糖醛酸;AF4,AF6,SEK4均不含硫酸根,其余樣品含有少量硫酸根。AF4,AF6及SEK4中主要是Glc,分別為85.5%,80.4%和87.0%;AF1,AF3,SEK5及SEK6的中主要為Man和Glc,分別占總單糖比例的72.5%,80.7%,81.9%和81.3%;AF2、SEK1、SEK2、SEK3中主要是Man,分別達(dá)66.5%、67.5%、52.9%、73.5%。
2.以含Ma
3、n含量高且多糖得率高的AF3為對象,通過732#陽離子交換柱層析、Capto Q陰離子交換柱層析及Sepharyl S100凝膠柱層析對其進(jìn)行分離純化,得到多糖組分AF3-A1及AF3-A2,其中AF3-A1相對分子量32kDa,總糖含量85.9%,不含蛋白以及硫酸根、糖醛酸等酸性基團(tuán),單糖種類主要含有Man(>95%),屬于中性甘露聚糖。通過甲基化GC/MS、NMR、MS等方法對純化后多糖組分AF3-A1結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析,表明,AF3-A
4、1是以(1→6)-α-D-Manp為主鏈,C-2位存在一定分支結(jié)構(gòu),是由聚合度從2-5不等的β-D-Manp和(1→2)-α-D-Manp的甘露聚糖組成。
3.粗多糖AF3經(jīng)Capto Q陰離子交換柱分離純化0.6M鹽洗得到的組分AF3-A2的相對分子量82kDa,總糖含量79%,蛋白含量15%,不含硫酸根、糖醛酸等酸性基團(tuán);單糖中以甘露糖與半乳糖的摩爾比為8.3:1.7,是主要含甘露糖的雜多糖,屬于半乳甘露聚糖肽。同樣通過甲
5、基化GC/MS、NMR、MS等方法對AF3-A2多糖結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析。結(jié)果表明AF3-A2是以α-D-(1→6)-Manp為主鏈,C-2位存在一定的分支結(jié)構(gòu),其支鏈中的一部分是由聚合度從2-5不等的α-D-(1→2)Manp、α-D-(1→2)-Manp-α-D-(1→3)-Manp及β-D-Galf(1→組成。
4.對12種不同培養(yǎng)條件海洋微生物胞外多糖、2種純化多糖及2種甘露寡糖混合物體外對小鼠免疫調(diào)節(jié)作用進(jìn)行研究。結(jié)果表明,
6、微生物多糖體外對正常小鼠脾淋巴細(xì)胞、胸腺淋巴細(xì)胞增殖能力普遍高于甘露聚糖肽注射液的增殖能力,且在一定范圍內(nèi)呈劑量依賴趨勢;粗多糖體外對正常小鼠脾淋巴細(xì)胞、胸腺淋巴細(xì)胞增殖作用普遍高于純化后多糖及甘露聚寡糖混合物;樣品與陽性對照品ConA及LPS發(fā)生協(xié)同作用,共同促進(jìn)正常小鼠免疫細(xì)胞代謝活力;粗多糖AF3及SEK1體外對正常小鼠胸腺細(xì)胞具有促進(jìn)作用,可以顯著增強(qiáng)正常小鼠胸腺細(xì)胞代謝活力。另外在這16種胞外多糖及寡糖混合物體外抗H1N1活性
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