三株海洋微生物胞外多糖的分離純化及結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、海洋中生活著物種豐富的微生物。海洋環(huán)境下生活的微生物與陸地微生物所產(chǎn)的胞外多糖在很多方面有很大差別。海洋微生物所產(chǎn)胞外多糖具有結(jié)構(gòu)新穎及生物活性多樣等特點。因此，在醫(yī)藥和食品等行業(yè)得到了廣泛應(yīng)用，具有很大的商業(yè)開發(fā)價值。本文以一株紅樹林來源真菌和兩株深海來源放線菌所產(chǎn)水溶性胞外多糖作為研究對象，利用色譜分離技術(shù)分離純化多糖，采用化學(xué)方法和現(xiàn)代波譜分析技術(shù)研究多糖的結(jié)構(gòu)。研究結(jié)果如下:
　　1.從海南文昌地區(qū)紅樹林根泥真菌Asper

2、gillus sp.oucmdz-1914發(fā)酵液中提取得到多糖粗品ouc，依次用Q-Sepharose Fast Flow離子交換層析和Sephacryl S-100凝膠過濾層析法分離和純化得到ouc-1、ouc-2、ouc-3和ouc-4四種多糖組分?；瘜W(xué)分析表明，四種多糖組分的總糖含量均在90％以上，蛋白含量均較低，除ouc-1外其他三種多糖組分中均含有少量氨基糖。PMP柱前衍生高效液相色譜和高效凝膠滲透色譜分析表明，ouc-1、o

3、uc-2、ouc-3和ouc-4單糖組成均以Man為主，還含有少量的Glc和Gal，ouc-2、ouc-3和ouc-4含有少量的GlcN;四種多糖的分子量分別為2.9 kDa、4.26 kDa、3.7 kDa和4.1 kDa。多糖ouc-2、ouc-3和ouc-4經(jīng)甲基化衍生后進(jìn)行GC-MS分析以判斷糖苷鍵連接方式，結(jié)果表明，ouc-2、ouc-3和ouc-4單糖連接方式主要為Manp(1→、→2)Manp(1→、→3)Manp(1→、

4、→6)Manp(1→和→2，6)Manp(1→，ouc-3中還含有Galf(1→和→4)Glcp(1→，ouc-4含有少量的→4)Glcp(1→。
　　2.從南海深海海泥放線菌oucmdz-2984和南大西洋中脊深海泥樣放線菌oucmdz-3763的發(fā)酵液中分別提取得到兩種多糖粗品MDZ和SH，用Q-Sepharose Fast Flow離子交換柱和Sephacryl S-100凝膠過濾層析柱分離和純化兩種多糖粗品，從MDZ中分離

5、得到兩種多糖mdz-1和mdz-2。PMP柱前衍生高效液相色譜分析表明，mdz-1主要含有Man，還含有少量的GlcN、Glc、Gal、Xly、Ara和Fuc; mdz-2主要含有Glc、GlcN和GlcUA，還含有少量的Man、Gal、Ara和Fuc。高效凝膠滲透色譜分析表明，mdz-1和mdz-2分子量分別為4.88 kDa和4.65 kDa。從SH粗多糖中分離得到sh-11、sh-12和sh-2三種多糖組分，用PMP-HPLC法檢

6、測多糖的單糖組成，高效凝膠滲透色譜法測定分子量，甲基化分析多糖中單糖的連接方式。結(jié)果表明，多糖sh-11主要含有Ara，還有少量Glc和Gal，分子量為9.1 kDa，sh-11中主要含有Araf(1→、→4)Arap(1→、Galp(1→和→4)Glcp(1→四種連接片段;多糖sh-12含有Glc、Gal和Ara三種單糖，分子量為2.21 kDa，含有的連接方式有Glcp(1→、→2)Arap(1→、→2)Galp(1→、→4)Gal