非小細(xì)胞肺癌CT能譜成像與VEGF、MVD及Ki-67表達(dá)的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　通過對非小細(xì)胞肺癌(Non-small cell lung cancer，NSCLC)CT能譜成像的碘-水配對基物質(zhì)濃度值、能譜曲線斜率、40keV對應(yīng)的CT值的測量以及肺癌組織中VEGF、MVD及Ki-67表達(dá)的測定，探討非小細(xì)胞肺癌CT能譜成像定量參數(shù)與腫瘤生物標(biāo)志物的相關(guān)關(guān)系。
　　資料與方法:
　　48例經(jīng)手術(shù)切除且病理學(xué)檢查證實(shí)為NSCLC的患者，術(shù)前均采用寶石能譜CT(Discovery CT7

2、50 HD，GE Healthcare，Mliwaukee，USA)在能譜掃描模式(GemStone imaging，GSI)下行胸部雙期增強(qiáng)掃描。管電壓為140和80 kVp瞬時(0.5s)切換，管電流采用自動毫安，螺旋掃描速度為0.5s/周，螺距為0.516，準(zhǔn)直器寬度為40mm。采用高壓注射器經(jīng)外周靜脈注入對比劑碘海醇(300mgI/ml)，注射劑量為1.2mg/kg，注射流率為3.0ml/s。掃描層厚及層間距均為5.00mm，注

3、入對比劑后28 S行動脈期掃描，45 S行靜脈期掃描。將動脈期原始數(shù)據(jù)在單能重建算法下重建為層厚及層間距均為0.625 mm的圖像傳至后處理工作站AW4.4(GE Healthcare，USA)，應(yīng)用寶石能譜成像瀏覽器(GSI Viewer)軟件進(jìn)行分析處理，病灶能譜分析盡量選取病灶中間層面，避開壞死、空洞、鈣化及血管等，放置圓形感興趣區(qū)(Regions of interest，ROI)，測量ROI碘-水配對基物質(zhì)濃度值(g/L)及40

4、 KeV對應(yīng)的CT值，并計(jì)算相應(yīng)的能譜曲線斜率:| CT40keV-CT100 keV|/60，所有能譜曲線均經(jīng)水的能譜曲線標(biāo)準(zhǔn)化處理。
　　手術(shù)切除標(biāo)本經(jīng)中性福爾馬林緩沖液固定、組織處理、石蠟包埋備用。采用兔抗人VEGF單克隆抗體(1∶50，ab52917，Abcam，Cambridge，UK)、兔抗人CD105單克隆抗體(1∶250，ab169545，Abcam，Cambridge，UK)、兔抗人Ki-67單克隆抗體(1∶50

5、0，ab92742，Abcam，Cambridge，UK)、免疫組化檢測試劑盒，應(yīng)用MaxVision快捷免疫組化染色檢測其VEGF、MVD及Ki-67的表達(dá)情況。
　　VEGF結(jié)果判定:VEGF表達(dá)陽性細(xì)胞為胞漿或胞膜出現(xiàn)淺黃色、棕黃色或黃褐色顆粒。腫瘤組織VEGF表達(dá)以細(xì)胞染色強(qiáng)度和細(xì)胞染色百分率得分之和進(jìn)行判定。染色強(qiáng)度:無染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分。細(xì)胞染色百分率:陽性細(xì)胞數(shù)≤5％為0分，5％～2

6、5％為1分，25％～50％為2分，＞50％為3分。兩者相加為VEGF表達(dá)總得分。根據(jù)總得分情況將VEGF表達(dá)分為四個等級:0分為陰性（-），1、2分為弱陽性(+)，3、4分為中等陽性(++)，5、6分為強(qiáng)陽性(+++)。
　　MVD結(jié)果判定按照Weidner等所描述的方法。兩名病理科醫(yī)師使用光學(xué)顯微鏡(Leica DM2500)在低倍及高倍視野下觀察。先在低倍(×100)顯微鏡下選出三個微血管數(shù)最多的區(qū)域（熱點(diǎn)），再在高倍(×40

7、0)顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)，三個視野的微血管數(shù)取平均值即為MVD。棕黃色的陽性內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇且與鄰近微血管、瘤組織及其他結(jié)締組織成分清晰分離的計(jì)為一個微血管，無論有無管腔形成。管徑大于8個紅細(xì)胞或有肌層的血管不予計(jì)數(shù)。
　　Ki-67結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn):Ki-67著色于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒，高倍鏡(×400)下隨機(jī)選取5個視野，每個視野計(jì)數(shù)100個細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞平均數(shù)。Ki-67表達(dá)用陽性細(xì)胞百分率表示，并分為四個等級((0，＜1

8、％;1，1-10％;2，11-30％;3，＞30％)。
　　所有數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析均采用SPSS20.0(IBM Inc.，Armonk，NY，USA)統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示;用單因素方差分析進(jìn)行VEGF和Ki-67表達(dá)等級不同的NSCLC患者間能譜參數(shù)的比較，然后用SLD-t檢驗(yàn)的方法進(jìn)行組間的兩兩比較。用Spearman等級相關(guān)分析觀察NSCLC組織VEGF、MVD和Ki-67的表達(dá)與CT能譜參數(shù)（碘

9、濃度、水濃度、能譜曲線斜率和40KeV對應(yīng)的CT值）的相關(guān)性。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　在48例NSCLC患者的手術(shù)標(biāo)本中，VEGF表達(dá)總得分為1.75±1.50分。VEGF表達(dá)陰性者18例(37.50％);表達(dá)陽性者30例(62.50％)，其中弱陽性12例，中等陽性18例，沒有表達(dá)強(qiáng)陽性者。碘濃度、能譜曲線斜率及40KeV對應(yīng)的CT值在不同VEGF表達(dá)級別組間存在顯著差異。組間兩兩比較:陰性與中等陽

10、性、弱陽性與中等陽性間的碘濃度、能譜曲線斜率及40KeV對應(yīng)的CT值有顯著差異，而陰性與弱陽性間上述參數(shù)無顯著差異;水濃度在各級別間均無顯著差異。碘濃度、能譜曲線斜率和40KeV對應(yīng)的CT值與腫瘤組織內(nèi)VEGF的表達(dá)得分和表達(dá)強(qiáng)度均呈正相關(guān);水濃度與VEGF的表達(dá)得分和表達(dá)強(qiáng)度均無相關(guān)關(guān)系。
　　MVD值為16.50±6.48，CT能譜成像測得的碘濃度為1.05±0.41g/L，水濃度為1021.90±10.78g/L，能譜曲線斜

11、率為1.18±0.47，40KeV對應(yīng)的CT值為104.16±33.66HU。MVD值與碘濃度呈正相關(guān)（r=0.31，P=-0.032），與水濃度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.29，P=-0.042），與能譜曲線斜率呈正相關(guān)（r=-0.30，P=0.038），與40KeV對應(yīng)的CT值無相關(guān)關(guān)系（r=0.13，P=0.391）。
　　Ki-67陽性細(xì)胞百分率為40.83％±31.62％。表達(dá)1級10例(20.83％)，2級13例(27.08％

12、)，3級25例(52.08％)，沒有0級的患者。不同Ki-67表達(dá)等級間碘濃度、水濃度、能譜曲線斜率及40KeV對應(yīng)的CT值均無顯著差異。NSCLC組織內(nèi)Ki-67陽性細(xì)胞百分率和表達(dá)等級與碘濃度、水濃度、能譜曲線斜率及40KeV對應(yīng)的CT值均無相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)論:
　　非小細(xì)胞肺癌CT能譜成像的碘濃度、能譜曲線斜率與VEGF及MVD的表達(dá)均呈正相關(guān)，可間接反映腫瘤血管的生成狀態(tài)，在肺癌的病理判斷、腫瘤的惡性程度及預(yù)后的預(yù)