肥大細(xì)胞與食管鱗狀上皮增生、癌變及血管生成關(guān)系的研究.pdf

1、背景與目的：
　　肥大細(xì)胞（Mast cell，MC）是腫瘤微環(huán)境中浸潤(rùn)的細(xì)胞之一，是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，在Ⅰ型超敏反應(yīng)及機(jī)體防御反應(yīng)中起重要作用。近年來(lái)的研究證實(shí)肥大細(xì)胞也參與了腫瘤發(fā)生發(fā)展，但在腫瘤中的具體作用尚不明確。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）是作用最強(qiáng)的促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)的細(xì)胞因子，研究表明肥大細(xì)胞能夠釋放VEGF。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)肥大細(xì)胞密度（Mast

2、cell density，MCD）及活化率、微血管密度（Microvessl denisty，MVD）和VEGF在食管癌及其對(duì)照組織中的表達(dá)情況，探討肥大細(xì)胞與鱗狀上皮增生、癌變和食管鱗癌血管生成之間的關(guān)系。
　　材料與方法：
　　材料：
　　收集2010年至2011年間汕頭大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院送檢的食管鱗癌手術(shù)標(biāo)本100例，每一例術(shù)前均未接受過(guò)放、化療，每例標(biāo)本均取癌組織、癌旁組織以及遠(yuǎn)離癌旁的切緣組織。將癌旁及切緣組織

3、按照增生程度分級(jí)，分為正常粘膜、單純性增生、低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變（Low grade intraepithelial neoplasia， LIN）和高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變（ High grade intraepithelial neoplasia，HIN）。
　　方法：
　　1. HE染色用以確定組織形態(tài)及進(jìn)行病理組織學(xué)診斷。
　　2.免疫組織化學(xué)染色選用肥大細(xì)胞特異的類胰蛋白酶抗體標(biāo)記肥大細(xì)胞，CD31抗體標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞，

4、VEGF抗體標(biāo)記VEGF蛋白，觀察其在食管正常粘膜、單純性增生、上皮內(nèi)瘤變及癌組織中的表達(dá)情況，分別計(jì)數(shù)各組 MCD、活化的肥大細(xì)胞數(shù)、MVD，參照Fromowitz方法（具體見后）對(duì)VEGF染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分。
　　3.圖像分析法應(yīng)用Leica IM50圖像采集系統(tǒng)和Image-pro Plus6.0圖像分析系統(tǒng)計(jì)數(shù)MCD、活化的MC數(shù)及MVD，并對(duì)VEGF染色結(jié)果進(jìn)行染色強(qiáng)度分級(jí)。
　　4.統(tǒng)計(jì)分析用 SPSS13.0統(tǒng)計(jì)

5、軟件分析處理。方法采用單因素方差分析（One-way ANOVA）、卡方檢驗(yàn)、列聯(lián)表分析、Pearson及Spearman相關(guān)性分析。
　　結(jié)果：
　　1.從食管的正常粘膜到鱗癌組織均有MC的浸潤(rùn)，在正常、單純性增生、LIN、HIN組織中，主要分布在粘膜層和粘膜下層，在食管鱗癌組織中主要分布在癌巢間質(zhì)及癌組織浸潤(rùn)的前沿。MCD在癌旁粘膜最多，癌組織內(nèi)最少（P<0.01）。癌組織中MC活化脫顆粒比例最高（66.6％），其次是癌

6、旁粘膜（30.2%），切緣粘膜最低（27.1%）（P<0.01）。隨著鱗狀上皮增生程度及癌變級(jí)別的增加，MC活化率逐級(jí)遞增，正常、單純性增生之間的差異無(wú)顯著性（P>0.05），到 LIN組差異具有顯著性，到鱗癌組具有極顯著性差異（P<0.01），MC活化率達(dá)65%以上。MCD與腫瘤大小呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），與浸潤(rùn)深度呈正相關(guān)（P<0.05）?；罨疢C數(shù)與浸潤(rùn)深度呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。
　　2.微血管在食管的正常、單純性增生

7、、LIN、HIN組織中，主要分布在粘膜層和粘膜下層，在鱗癌組織中主要分布在癌巢間質(zhì)及癌組織浸潤(rùn)的前沿。隨著鱗狀上皮增生程度及癌變級(jí)別的增加，MVD逐級(jí)增加（P<0.01），癌組織中MVD最高，但在非癌變各組及鱗癌各組之間差異無(wú)顯著性（P>0.05）。MVD在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高（P<0.05）。
　　3. VEGF在正常粘膜為陰性，在上皮內(nèi)瘤變上皮陽(yáng)性率為31%，在癌組織中陽(yáng)性率為52%（P<0.01），主要表達(dá)于癌細(xì)

8、胞及異型細(xì)胞的胞漿，癌巢間質(zhì)細(xì)胞如淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞等也有表達(dá)。
　　4.隨著VEGF評(píng)分的增加，MCD有逐級(jí)遞減的趨勢(shì)（P<0.01），肥大細(xì)胞活化率、MVD有逐級(jí)遞增的趨勢(shì)（P<0.01）。VEGF、活化的肥大細(xì)胞、MVD三者之間呈正相關(guān)關(guān)系（P<0.01）。Simple套染顯示，肥大細(xì)胞胞漿VEGF陽(yáng)性。
　　結(jié)論：
　　1.MC在正常、單純性增生、LIN、HIN組織中，主要分布在粘膜層和粘膜下層，在食管鱗癌組織