選擇性孕酮受體調(diào)節(jié)劑Asoprisnil抗小鼠孕卵著床的效果及其對(duì)子宮內(nèi)膜容受性的影響.pdf

1、第一部分，Asoprisnil抗小鼠孕卵著床的效果
　　目的:觀察選擇性孕酮受體調(diào)節(jié)劑Asoprisnil抗小鼠孕卵著床的效果。
　　方法:領(lǐng)取8-12周、體重25±5g未生育的健康雌性昆明小鼠,與雄鼠交配后查到陰栓記為孕第一天。將孕鼠隨機(jī)分為賦形劑對(duì)照組,低劑量、中劑量和高劑量Asoprisnil組。小鼠孕第1-3天每日灌胃給藥一次,第八天處死孕鼠取子宮組織,計(jì)數(shù)著床胚胎個(gè)數(shù)并計(jì)算著床率(成功著床動(dòng)物數(shù)/實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)),并留

2、取部分子宮組織做HE染色后光鏡下觀察子宮內(nèi)膜形態(tài)學(xué)改變。
　　結(jié)果:①賦形劑對(duì)照組、低劑量組、中劑量組和高劑量Asoprisnil組孕鼠的著床率逐漸降低,分別為95％、75%、35%和20%。中、高劑量Asoprisnil組與賦形劑對(duì)照組比較差異顯著(P<0.01)。中、高劑量Asoprisnil組與低劑量組間差異顯著(P<0.01)。②賦形劑對(duì)照組、低、中、高劑量組平均著床胚胎數(shù)分別為11.80±3.38、6.40±5.50、4

3、.45±6.44和2.15±4.88,低、中和高劑量Asoprisnil組與賦形劑對(duì)照組比較,低、中與高劑量Asoprisnil組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。③對(duì)照組中可見孕第八天小鼠宮腔上皮為單層柱狀上皮細(xì)胞,胞質(zhì)豐富;腺體皺褶、彎曲,腺體增生明顯;內(nèi)膜間質(zhì)中腺體和血管增多,基質(zhì)細(xì)胞疏松分布,細(xì)胞呈蛻膜樣改變。而Asoprisnil組子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞表現(xiàn)為增殖期水平,腺體較直,增生不明顯,宮腔上皮細(xì)胞核大而胞質(zhì)較少;內(nèi)膜間

4、質(zhì)中腺體少見,基質(zhì)細(xì)胞緊密排列,基質(zhì)細(xì)胞蛻膜化明顯受抑。
　　結(jié)論:Asoprisnil能通過(guò)抑制子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化以及基質(zhì)細(xì)胞的蛻膜化改變,打破子宮內(nèi)膜與胚胎發(fā)育的“精巧平衡”,進(jìn)而抑制小鼠胚胎著床。
　　第二部分，Asoprisnil對(duì)著床窗期小鼠子宮內(nèi)膜容受性的影響
　　目的:觀察選擇性孕酮受體調(diào)節(jié)劑Asoprisnil對(duì)著床窗期小鼠子宮內(nèi)膜容受性的影響。
　　方法:領(lǐng)取8-12周、體重25±5g未生育的

5、健康雌性昆明小鼠,與雄鼠交配后查到陰栓記為孕第一天。將孕鼠隨機(jī)分為賦形劑對(duì)照組,低劑量、中劑量和高劑量Asoprisnil組。小鼠孕第1-3天每日灌胃給藥一次,孕第五天頸椎脫臼處死孕鼠后取子宮組織,一部分用4%中性多聚甲醛固定后做HE染色和免疫組化檢測(cè)PCNA的表達(dá),一部分用2%戊二醛固定后做掃描電鏡和透射電鏡。
　　結(jié)果:①著床窗期小鼠子宮內(nèi)膜形態(tài)學(xué)的改變:賦形劑對(duì)照組小鼠著床窗期子宮內(nèi)膜宮腔上皮多為單層柱狀上皮細(xì)胞,腺體彎曲折

6、疊,增生活躍;基質(zhì)細(xì)胞蛻膜變,細(xì)胞體積大且疏松排列,胞質(zhì)豐富;間質(zhì)中腺體和血管豐富。Asoprisnil組小鼠子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞排列致密且層次增多,腺體直,增生不明顯;內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞蛻膜變不明顯,基質(zhì)細(xì)胞較小,排列致密;腺體和血管增生不明顯;子宮內(nèi)膜腺體和基質(zhì)的發(fā)育明顯不同步。
　?、谥泊捌谛∈笞訉m內(nèi)膜PCNA的表達(dá):著床窗期小鼠子宮內(nèi)膜腺體和基質(zhì)中均有PCNA表達(dá)。對(duì)照組中子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞PCNA的表達(dá)明顯較Asoprisni

7、l組強(qiáng),而基質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)較低。低、中、高劑量Asoprisnil組小鼠子宮腔上皮細(xì)胞中PCNA表達(dá)強(qiáng)度(AIOD)分別為0.14±0.02、0.16±0.03和0.15±0.01,與賦形劑對(duì)照組(0.21±0.03)比較差異有顯著性(P<0.01)。賦形劑對(duì)照組、低、中和高劑量Asoprisnil組小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中PCNA表達(dá)強(qiáng)度(AIOD)分別為0.15±0.02、0.17±0.02、0.18±0.03和0.17±0.01,差

8、異有顯著性(P<0.01)。
　?、跘soprisnil對(duì)著床窗期子宮內(nèi)膜胞飲突發(fā)育的影響:賦形劑對(duì)照組中小鼠子宮內(nèi)膜表面可見大量發(fā)育完全的胞飲突和少量發(fā)育中的胞飲突。其中發(fā)育完全的胞飲突均勻分布,邊緣清晰,表面光滑無(wú)微絨毛,顯示出良好的子宮內(nèi)膜容受性。高劑量Asoprisnil組中小鼠子宮內(nèi)膜表面多為退化的胞飲突,在子宮內(nèi)膜中呈灶狀分布的。胞飲突數(shù)量明顯減少且大小不一致,表面皺縮,可見較多微絨毛。低劑量Asoprisnil組子宮

9、內(nèi)膜表面可見較多發(fā)育中的胞飲突以及少量發(fā)育完全的胞飲突和退化的胞飲突,胞飲突大小不一,數(shù)量較對(duì)照組減少,結(jié)果顯示:Asoprisnil能明顯抑制小鼠子宮內(nèi)膜胞飲突的表達(dá)。
　?、蹵soprisnil對(duì)小鼠著床窗期子宮內(nèi)膜超微結(jié)構(gòu)的影響:賦形劑對(duì)照組中子宮內(nèi)膜宮腔上皮細(xì)胞間可見較多短且直的細(xì)胞連接復(fù)合體,間隙較窄;微絨毛整齊均勻分布于宮腔上皮細(xì)胞;上皮細(xì)胞胞質(zhì)中可見大量糖原,低電子密度的線粒體,分泌活動(dòng)旺盛的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器;小鼠

10、子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞分泌活躍。子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞核核膜完整,可見兩個(gè)或兩個(gè)以上的核仁;基質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)豐富,可見豐富的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核糖體;子宮內(nèi)膜間質(zhì)中可見豐富的小血管。高、低劑量Asoprisnil組子宮內(nèi)膜腔上皮細(xì)胞間連接復(fù)合體較賦形劑對(duì)照組長(zhǎng)且彎曲復(fù)雜,間隙變寬;子宮內(nèi)膜宮腔面可見長(zhǎng)短不一的微絨毛不均勻分布;子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞胞質(zhì)中可見大量脂滴,而糖原較少,高電子密度的線粒體,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器豐富。多數(shù)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞增生旺盛,可見多個(gè)核仁;少數(shù)子

11、宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞核膜不完整,表現(xiàn)出核固縮、核溶解現(xiàn)象;子宮內(nèi)膜間質(zhì)中出現(xiàn)異常的厚壁小血管。
　　結(jié)論:Asoprisnil抑制使小鼠著床窗期子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的增殖而促進(jìn)基質(zhì)細(xì)胞的增殖,腺上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞的發(fā)育不同步;抑制了著床窗期子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞胞飲突的發(fā)育;抑制著床窗期宮腔上皮細(xì)胞連接復(fù)合體的下調(diào)和基質(zhì)細(xì)胞的蛻膜化改變;
　　誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜間質(zhì)中出現(xiàn)異常厚壁小血管;Asoprisnil明顯降低了小鼠著床窗期子宮內(nèi)膜的容受性,