報(bào)告基因法測(cè)定重組人促紅素生物學(xué)活性研究.pdf

1、重組人促紅素能夠刺激紅細(xì)胞增生、分化和成熟,臨床主要用于治療腎性貧血。目前其生物學(xué)活性檢測(cè)方法主要是網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)法,但其操作復(fù)雜,周期長(zhǎng)。報(bào)告基因法由于具有操作簡(jiǎn)便,周期短,特異性好,變異度小等優(yōu)點(diǎn)已經(jīng)成為藥物生物學(xué)活性檢測(cè)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。
　　本研究的目的是建立一種快速檢測(cè)重組人促紅素生物學(xué)活性的報(bào)告基因法。在UT-7細(xì)胞的基礎(chǔ)上,利用重組人促紅素信號(hào)通路中的STAT5的DNA核心反應(yīng)元件SIE,GRR,GAS構(gòu)建報(bào)告基因載體

2、,構(gòu)建和篩選可穩(wěn)定傳代的活性檢測(cè)用的單克隆報(bào)告基因細(xì)胞株,然后建立報(bào)告基因方法并進(jìn)行相應(yīng)的方法學(xué)驗(yàn)證,最后對(duì)構(gòu)建好的報(bào)告基因細(xì)胞株進(jìn)行細(xì)胞檢定。本研究成功構(gòu)建了重組人促紅素的報(bào)告基因單克隆細(xì)胞株UT-7/G7,建立的報(bào)告基因法可以在24h內(nèi)完成重組人促紅素的生物學(xué)活性測(cè)定,新方法對(duì)兩批成品檢測(cè)的回收率在81.71％~102.44%之間,日內(nèi)精密度分別為6.6%和7.9%,日間精密度分別為6.0%和7.5%,對(duì)34批成品的檢測(cè),證明新方法