六神丸抗肺癌血管生成及信號轉導途徑的實驗及臨床研究.pdf

1、目的:通過體外實驗觀察六神丸含藥血清對人肺癌A549細胞增殖、凋亡、細胞形態(tài)、生長狀態(tài)、VEGF和VEGFmRNA、K-RAS、ERK1、ERK2、p-ERK蛋白表達的影響,K-RAS、ERK1、ERK2、p-ERK蛋白表達與VEGF表達的相關性,臨床觀察六神丸聯合化療治療未經任何治療ⅢB-IV期或不能手術ⅢA期肺癌患者的臨床療效和血清CEA、CYFRA21-1、VEGF的變化,探討六神丸抗血管生成是否通過激活Ras→Raf→MEK→M

2、APK信號轉導途徑及血清VEGF是否可作為臨床觀察療效指標之一。方法:1.實驗研究采用體外培養(yǎng)人肺癌A549細胞,以不同濃度六神丸含藥血清與A549共同孵育并分組觀察,MTT法檢測六神丸含藥血清對人肺癌細胞系A549的增殖、光學顯微鏡下觀察細胞形態(tài)、倒置相差顯微鏡下觀察生長狀態(tài)、流式細胞儀檢測六神丸含藥血清對細胞凋亡的影響、免疫細胞化學法測定VEGF、K-RAS、ERK1、ERK2、p-ERK蛋白表達情況,逆轉錄-聚合酶鏈反應法(RT-

3、PCR)檢測VEGFmRNA的影響。2.臨床研究觀察六神丸聯合化療及化療組對非小細胞肺癌患者的臨床療效及血清CEA、CYFRA21-1、VEGF表達水平的影響。全部病例均來自山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院,2009年12月至2011年12月腫瘤內科住院病人。制定病例納入標準,納入研究病人60例,隨機分為觀察組30例,對照組30例,對照組采用TP化療方案,觀察組在化療的同時及化療期間,同時給予六神丸。收集所有患者治療前及治療兩周期后外周血5ml,

4、酶聯免疫吸附測定法(ELISA)檢測VEGF水平,放射免疫分析法檢測CYFRA21-1、CEA表達水平,觀察治療前后的臨床療效。結果:1.實驗研究(1)六神丸含藥血清對體外培養(yǎng)A549細胞具有明顯細胞毒作用,且隨著含藥血清濃度的增加OD值逐漸降低,有顯著性差異。(2)各含藥血清組均可破壞人肺癌A549細胞的正常形態(tài),阻礙其增殖生長;六神丸含藥血清對人肺癌A549細胞的增殖抑制作用與含藥血清的濃度呈正相關;六神丸與DDP聯合用藥有協同作用

5、。(3)各含藥鼠血清組、DDP單藥組以及DDP+10％含藥鼠血清組的早期凋亡率明顯高于對照組;隨著含藥濃度的不斷升高,早期凋亡率也明顯增加;聯合組的早期凋亡率明顯高于各含藥鼠血清組和DDP單藥組。(4)各含藥鼠血清組、DDP單藥組以及DDP+10%含藥鼠血清組的VEGF、ERK1、ERK2、p-ERK、K-RAS表達量及VEGFmRNA相對表達量均明顯低于10%胎牛血清組,有顯著性差異;與藥物濃度呈負比。(5)統計結果顯示六神丸含藥血清

6、對A549細胞降低VEGF的表達與其對ERK-1、ERK-2、p-ERK、K-ras表達的影響呈顯著正相關(r=0.887,0.835,0.952,0.866)。2.臨床研究(1)兩組化療完成情況:觀察組2周期化療完成率93.3%(28/30),高于對照組86.7%(26/30);(2)近期客觀療效:經χ2檢驗,兩組有效率和病灶穩(wěn)定率比較均無顯著性差異;(3)兩組治療前后血清VEGF、CEA、CYFRA21-1水平的比較:兩組治療后VE

7、GF、CEA、CYFRA21-1表達水平均較治療前明顯下降;與對照組相比,觀察組VEGF、CEA表達水平更低,幅度下降更大,具有顯著統計學差異。與對照組相比,觀察組CYFRA21-1表達水平更低,但兩組比較無統計學差異。(4)兩組患者血清CEA、CYFRA21-1水平與VEGF水平行相關性分析:結果呈明顯正相關(r=0.399、0.275,P＜0.01)。結論:六神丸通過抑制Ras→Raf→MEK→MAPK信號轉導途徑降低肺癌A549細