六神丸抗肺癌血管生成及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的實(shí)驗(yàn)及臨床研究.pdf

1、目的:通過體外實(shí)驗(yàn)觀察六神丸含藥血清對(duì)人肺癌A549細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)、VEGF和VEGFmRNA、K-RAS、ERK1、ERK2、p-ERK蛋白表達(dá)的影響,K-RAS、ERK1、ERK2、p-ERK蛋白表達(dá)與VEGF表達(dá)的相關(guān)性,臨床觀察六神丸聯(lián)合化療治療未經(jīng)任何治療ⅢB-IV期或不能手術(shù)ⅢA期肺癌患者的臨床療效和血清CEA、CYFRA21-1、VEGF的變化,探討六神丸抗血管生成是否通過激活Ras→Raf→MEK→M

2、APK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及血清VEGF是否可作為臨床觀察療效指標(biāo)之一。方法:1.實(shí)驗(yàn)研究采用體外培養(yǎng)人肺癌A549細(xì)胞,以不同濃度六神丸含藥血清與A549共同孵育并分組觀察,MTT法檢測(cè)六神丸含藥血清對(duì)人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549的增殖、光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、倒置相差顯微鏡下觀察生長(zhǎng)狀態(tài)、流式細(xì)胞儀檢測(cè)六神丸含藥血清對(duì)細(xì)胞凋亡的影響、免疫細(xì)胞化學(xué)法測(cè)定VEGF、K-RAS、ERK1、ERK2、p-ERK蛋白表達(dá)情況,逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-

3、PCR)檢測(cè)VEGFmRNA的影響。2.臨床研究觀察六神丸聯(lián)合化療及化療組對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者的臨床療效及血清CEA、CYFRA21-1、VEGF表達(dá)水平的影響。全部病例均來自山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院,2009年12月至2011年12月腫瘤內(nèi)科住院病人。制定病例納入標(biāo)準(zhǔn),納入研究病人60例,隨機(jī)分為觀察組30例,對(duì)照組30例,對(duì)照組采用TP化療方案,觀察組在化療的同時(shí)及化療期間,同時(shí)給予六神丸。收集所有患者治療前及治療兩周期后外周血5ml,

4、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)VEGF水平,放射免疫分析法檢測(cè)CYFRA21-1、CEA表達(dá)水平,觀察治療前后的臨床療效。結(jié)果:1.實(shí)驗(yàn)研究(1)六神丸含藥血清對(duì)體外培養(yǎng)A549細(xì)胞具有明顯細(xì)胞毒作用,且隨著含藥血清濃度的增加OD值逐漸降低,有顯著性差異。(2)各含藥血清組均可破壞人肺癌A549細(xì)胞的正常形態(tài),阻礙其增殖生長(zhǎng);六神丸含藥血清對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的增殖抑制作用與含藥血清的濃度呈正相關(guān);六神丸與DDP聯(lián)合用藥有協(xié)同作用

5、。(3)各含藥鼠血清組、DDP單藥組以及DDP+10％含藥鼠血清組的早期凋亡率明顯高于對(duì)照組;隨著含藥濃度的不斷升高,早期凋亡率也明顯增加;聯(lián)合組的早期凋亡率明顯高于各含藥鼠血清組和DDP單藥組。(4)各含藥鼠血清組、DDP單藥組以及DDP+10%含藥鼠血清組的VEGF、ERK1、ERK2、p-ERK、K-RAS表達(dá)量及VEGFmRNA相對(duì)表達(dá)量均明顯低于10%胎牛血清組,有顯著性差異;與藥物濃度呈負(fù)比。(5)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示六神丸含藥血清

6、對(duì)A549細(xì)胞降低VEGF的表達(dá)與其對(duì)ERK-1、ERK-2、p-ERK、K-ras表達(dá)的影響呈顯著正相關(guān)(r=0.887,0.835,0.952,0.866)。2.臨床研究(1)兩組化療完成情況:觀察組2周期化療完成率93.3%(28/30),高于對(duì)照組86.7%(26/30);(2)近期客觀療效:經(jīng)χ2檢驗(yàn),兩組有效率和病灶穩(wěn)定率比較均無顯著性差異;(3)兩組治療前后血清VEGF、CEA、CYFRA21-1水平的比較:兩組治療后VE

7、GF、CEA、CYFRA21-1表達(dá)水平均較治療前明顯下降;與對(duì)照組相比,觀察組VEGF、CEA表達(dá)水平更低,幅度下降更大,具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與對(duì)照組相比,觀察組CYFRA21-1表達(dá)水平更低,但兩組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(4)兩組患者血清CEA、CYFRA21-1水平與VEGF水平行相關(guān)性分析:結(jié)果呈明顯正相關(guān)(r=0.399、0.275,P＜0.01)。結(jié)論:六神丸通過抑制Ras→Raf→MEK→MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑降低肺癌A549細(xì)