益氣活血中藥促血管生成的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制研究及相關(guān)文獻評價.pdf

1、治療性血管新生已經(jīng)成為缺血性疾病研究領(lǐng)域的熱點，益氣活血中藥治療冠心病的歷史悠久，療效顯著，其促進血管新生，改善心肌供血，已經(jīng)通過臨床和實驗研究得到證實，因此益氣活血中藥促血管新生可能是其治療冠心病的重要機制之一。本研究通過探討益氣活血中藥促大鼠缺血心肌血管新生的分子機制，揭示其干預(yù)血管生成的作用和分子靶標(biāo)，為其防治缺血性疾病提供實驗依據(jù)。
　　 本論文分為三部分：基礎(chǔ)研究、臨床文獻系統(tǒng)評價和文獻綜述。
　　 一、基礎(chǔ)研

2、究包括以下三部分：
　　 實驗一：益氣活血中藥對大鼠缺血心肌的促血管生成作用
　　 目的：觀察益氣活血中藥人參三七組方促進大鼠缺血心肌血管新生的作用。
　　 方法：100只Wistar大鼠隨機分為空白組、假手術(shù)組、模型組、倍他樂克組和大、小劑量人參三七組方組。采用冠狀動脈結(jié)扎法建立大鼠急性心梗模型，并于造模后予相應(yīng)藥物治療12 d。觀察各組心肌細胞形態(tài)學(xué)改變，檢測血清血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)的表達；采用Ⅷ

3、因子及CD105抗體檢測微血管密度。結(jié)果：人參三七組方能夠減輕心肌細胞變性，減少炎癥細胞，增加微血管密度，提高血清VEGF的濃度。結(jié)論：人參三七組方能夠保護缺血心肌細胞，具有良好促進急性心梗后大鼠缺血心肌的微血管新生，增加缺血心肌微血管密度的作用。
　　 實驗二：益氣活血中藥對大鼠缺血心肌VEGFR—2和HIF—1α表達的影響
　　 目的：探討益氣活血中藥人參三七組方對AMI大鼠缺血心肌VEGFR—2和HIF—1α表達的

4、影響。方法：造模及處理方法同實驗一，給藥結(jié)束后，蛋白免疫印跡法檢測缺血心肌的VEGFR—2和HIF—1α的蛋白表達，實時聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法檢測缺血心肌VEGFR—2、HIF—1αmRNA表達。結(jié)果：大、小劑量人參三七組方組及倍他樂克組VEGFR—2、HIF—1α蛋白和mRNA表達均顯著高于模型組(P<0.05);大、小劑量組之間比較，差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義。倍他樂克組VEGFR—2、HIF—1α蛋白和mRNA高于大、小劑量人參三七組方組(P<

5、0.01)。結(jié)論：人參三七組方能夠促進缺血心肌VEGFR—2、HIF—1α表達，從而改善心肌缺血，促進側(cè)支循環(huán)的形成，具有一定劑量依賴性。
　　 實驗三：益氣活血中藥對Ras下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響
　　 目的：觀察益氣活血中藥人參三七組方對Ras信號通路的影響，探討益氣活血中藥促進血管新生的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。方法：造模及處理方法同實驗一，給藥結(jié)束后，蛋白免疫印跡法檢測缺血心肌中Ras、c—Raf—1、ERK1/2及p—ERK

6、1/2的蛋白表達，實時聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法檢測缺血心肌Ras、c—Raf—1、ERK1、ERK2 mRNA表達。結(jié)果：各組ERK1/2蛋白表達無顯著性差異，大、小劑量人參三七組方組及倍他樂克組Ras、c—Raf—1、p—ERK1/2蛋白和Ras、c—Raf—1、ERK1/2mRNA表達均顯著高于模型組(P<0.05)。結(jié)論：人參三七組方能夠促進缺血心肌Ras信號通路上的Ras、c—Raf—1及ERK1/2表達，說明人參三七組方可能通過Ras

7、信號通路來促進血管新生。
　　 二、臨床文獻系統(tǒng)評價：對1994年～2009年在科技期刊上公開發(fā)表的益氣活血中成藥治療不穩(wěn)定心絞痛的臨床文獻進行系統(tǒng)評價。
　　 目的：對益氣活血中成藥治療不穩(wěn)定心絞痛臨床研究進行系統(tǒng)評價。方法：①以中文標(biāo)題：不穩(wěn)定性心絞痛and(全部檢索條目：中醫(yī)or中藥or中西醫(yī)結(jié)合)and(全部檢索條目：益氣or活血)的檢索式檢索中國生物醫(yī)學(xué)文獻光盤數(shù)據(jù)庫，年限為1994年1月至2009年12月。②

8、由2位研究者按照文獻納入、排除標(biāo)準(zhǔn)獨立進行文獻篩選，意見不同者通過討論解決。⑧獲取文獻的相關(guān)研究特征資料，并加以評價。④對合格的隨機對照試驗，進行定量的Meta分析。結(jié)果：①共檢索到170個文獻。②經(jīng)兩次篩選，剔除不符合要求以及重復(fù)報道的文獻，最終共有17篇文獻入選評價。③對17篇文獻進行Meta分析，總病例數(shù)1644例。④益氣活血中成藥包括愈心痛膠囊、通心絡(luò)膠囊、復(fù)方丹參滴丸(片)、舒心益脈膠囊、步長穩(wěn)心顆粒、活血通脈膠囊、血府逐瘀膠

9、囊。Meta分析顯示，加用益氣活血中成藥干預(yù)對不穩(wěn)定心絞痛患者心絞痛癥狀和心電圖的改善較單純西醫(yī)基礎(chǔ)治療明顯提高，能減少硝酸甘油的用量，顯著降低血漿內(nèi)皮素(ET)、血漿內(nèi)α—顆粒膜蛋白(GMP—140)等與動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定相關(guān)指標(biāo)。結(jié)論：益氣活血中成藥干預(yù)不穩(wěn)定心絞痛在改善心絞痛的癥狀、心電圖表現(xiàn)，減少硝酸甘油的用量以及降低ET、GMP—140方面有一定的療效。但由于納入研究的質(zhì)量不高，還有待進一步研究。
　　 三、文獻綜述

10、部分通過對123篇文獻的梳理和總結(jié)，探討和綜述了VEGF、CD105與血管新生的關(guān)系及其研究進展，并對益氣活血法促冠心病血管新生的研究文獻進行了初步總結(jié)，提出今后應(yīng)臨床研究與體內(nèi)外實驗研究相結(jié)合，從多途徑、多環(huán)節(jié)探討中藥促進冠心病缺血心肌血管新生的作用及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制。
　　 本研究以Ras蛋白信號通路為主線，觀察人參、三七組方對血管生成過程中Ras信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的干預(yù)作用及其機制，屬于中醫(yī)藥防治冠心病研究領(lǐng)域的原創(chuàng)性研究工作；借鑒