益氣活血治法促缺血心肌血管生成實驗研究及其療效評價.pdf

1、目前，血管新生已成為世界醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的熱點課題，促進缺血區(qū)血管生成是一種具有吸引力的、新穎的治療策略。中醫(yī)藥益氣活血、祛瘀生新的治療法則及其臨床有效性，為中醫(yī)藥血管新生的研究提供了理論和臨床依據(jù)。 本課題研究分為三部分：文獻綜述、基礎(chǔ)研究和臨床研究。 1.文獻綜述：本部分分別從治療性血管新生和缺血性心臟病、中醫(yī)藥治療性血管新生研究進展以及中醫(yī)臨床療效評價研究概況三個方面進行了綜述。 2.基礎(chǔ)研究：包括以下四個基礎(chǔ)實驗

2、。 實驗一、衰老大鼠心肌梗死模型的建立目的：復(fù)制衰老大鼠心肌梗死模型。方法：皮下注射D-半乳糖500mg/kg·d，連續(xù)6周，在此基礎(chǔ)上行開胸術(shù)，結(jié)扎冠狀動脈左前降支。觀察大鼠基本狀態(tài)、飲食量、自發(fā)性活動、心電圖，測定外周血谷胱甘肽過氧化物酶活性和心肌組織脂褐素含量。結(jié)果：此實驗方法不僅達到了大鼠衰老標準，同時也成功地造成模型動物心肌梗死。結(jié)論：D-半乳糖與冠脈結(jié)扎制造的復(fù)合模型符合衰老與心肌梗死的基本改變。 實驗二、益

3、氣活血中藥對衰老大鼠缺血心肌的促血管生成作用 目的：探討益氣活血代表方當歸補血湯對心肌梗死大鼠冠狀動脈側(cè)支血管生成的影響及其機制。方法：所有大鼠均運用D-半乳糖皮下注射與冠脈結(jié)扎方法制造衰老大鼠心肌梗死模型。64只造模成功大鼠隨機分成衰老組、衰老心梗組、倍它樂克組、當歸補血湯大劑量組、當歸補血湯中劑量組、當歸補血湯小劑量組。觀察心梗2周后梗死面積，梗死邊緣區(qū)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、Ⅷ因子相關(guān)抗原和缺氧誘導(dǎo)因子-1α的表達量

4、，以及血清中VEGF濃度。結(jié)果：當歸補血湯能夠增加缺血心肌微血管密度和促進VEGF以及缺氧誘導(dǎo)因子-1α的表達，并且可提高血清中VEGF的濃度，與倍它樂克作用相當，其中以中、小劑量效果較佳。結(jié)論：當歸補血湯能夠促進衰老大鼠缺血心肌冠脈側(cè)支血管的生成，對缺血心肌具有保護作用。 實驗三、益氣活血中藥對缺血心肌血管新生信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的影響 目的：探討益氣活血代表方當歸補血湯對缺血心肌血管新生信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的影響。方法：運用West

5、ern-blotting蛋白檢測方法，對缺血心肌的p38MAPK、PI3K以及AKT蛋白進行了分析。結(jié)果：當歸補血湯具有不同程度地促進PI3K以及AKT蛋白表達的作用，以中劑量組效果最為明顯。結(jié)論：益氣活血代表方當歸補血湯可能通過激活PI3K，從而引起下游蛋白AKT的進一步表達，從而將信號傳至核內(nèi)，引起VEGFmRNA的表達，產(chǎn)生促血管生成效應(yīng)。 實驗四、益氣活血中藥含藥血清對內(nèi)皮細胞VEGF受體表達的影響目的：探討益氣活血代表

6、方當歸補血湯含藥血清對人臍靜脈內(nèi)皮細胞VEGF受體表達的影響。方法：采用H2O2制備內(nèi)皮細胞損傷模型，將按常規(guī)培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)隨機分為6組：(1)正常對照組；(2)100μmol/LH2O2培養(yǎng)組；(3)bFGF+100μmol/LH2O2組；(4)大劑量組+100μmol/LH2O2；(5)中劑量組+100μmol/LH2O2；(6)小劑量組+100μmol/LH2O2。HUVECVEGF受體的檢測采用免疫細胞化學(xué)

7、熒光染色法，同時用RT-PCR方法測定VEGFmRNA的表達。結(jié)果：與正常對照組比較，當歸補血湯含藥血清各組VEGF受體均有不同程度的表達，其中中劑量組和小劑量組具有明顯的上調(diào)受體的作用。對于VEGFmRNA的表達，以H2O2培養(yǎng)組、中劑量+H2O2組和小劑量+H2O2組較為顯著。結(jié)論：化學(xué)性H2O2損傷可以成功地造成HUVEC自由基損傷，益氣活血中藥當歸補血湯可以上調(diào)VEGF受體KDR/Flk-1以及VEGFmRNA的表達，促進血管新

8、生。 3.臨床研究：益氣活血法治療急性心肌梗死(AMI)臨床研究文獻的療效評價 目的：對益氣活血中藥治療AMI臨床研究進行系統(tǒng)評價，并對合格文獻進行定量的Meta分析。方法：①以[(中文標題：心肌梗塞or心肌梗死)AND(全部檢索條目：中醫(yī)or中藥or中西醫(yī)結(jié)合)AND(全部檢索條目：益氣and活血)】的檢索式檢索中國生物醫(yī)學(xué)文獻光盤數(shù)據(jù)庫，年限為1979年1月至2005年12月。②由2位研究者按照文獻納入、排除標準獨立

9、進行文獻篩選，意見不同者通過討論解決。③獲取文獻的相關(guān)研究特征資料，并加以評價。④對合格的隨機對照試驗，進行定量的Meta分析。結(jié)果：①共檢索到130個文獻。②經(jīng)兩次篩選，剔除不符合要求以及重復(fù)報道的文獻，最終共有42篇文獻入選評價。③按照現(xiàn)代臨床流行病學(xué)的觀點，中醫(yī)藥治療AMI的臨床研究存在遵循標準的程度不足、研究設(shè)計缺陷較明顯(特別是隨機、盲法和統(tǒng)計學(xué)方法)、觀察指標選擇不盡理想(特別是缺乏遠期預(yù)后指標)等問題。對提到“隨機”的文獻

10、進行Jadad評分，均為低質(zhì)量的隨機對照試驗(1分)。而非隨機對照臨床研究質(zhì)量評分結(jié)果，也沒有1篇得分超過5分(總分是12分)。④只有6篇文獻可以進入Meta分析程序，總病例數(shù)僅592例，Meta分析顯示與常規(guī)西藥相比，加用益氣活血中藥進行干預(yù)對AMI患者左室舒張早晚期速度峰值比(E/A)和左室舒張舒張末期內(nèi)徑(LVEDd)沒有影響。而益氣活血中藥組左室射血分數(shù)(EF)明顯高于對照組，左室每分鐘心輸出量(CO)也明顯高于對照組，同時臨床