巴戟天寡糖促治療性血管生成作用的實驗研究.pdf

1、冠心病是一種發(fā)病率高且嚴(yán)重危害健康的心血管疾病。血管新生療法即治療性血管新生在冠心病等缺血性疾病患者中具有潛在的廣泛的市場。各種血管生長因子及其轉(zhuǎn)基因治療的促進(jìn)血管生成作用已獲得認(rèn)可，但在臨床應(yīng)用中仍存在有效性和安全性等問題。近年來，中醫(yī)藥治療性血管生成的研究取得了不少成果。研究已證實，補腎中藥具有促進(jìn)血管生成的作用。巴戟天(Radix morindaofficinalis，RMO)為補腎壯陽的常用中藥。巴戟天寡糖(Morindaoff

2、icinalis Howoligosaccharides，MOO)是巴戟天醇提物水溶性部分中的主要有效成分。導(dǎo)師組以往研究表明，MOO具有明顯的抗缺氧復(fù)氧損傷、保護心肌作用。然而其是否具有促血管生成作用，其心肌保護作用是否與其促進(jìn)缺血心肌側(cè)枝循環(huán)建立有關(guān)，尚未見報道。 本課題在導(dǎo)師組以往研究的基礎(chǔ)上，旨在通過制備雞胚絨毛尿囊膜(chickchofioallantoic membrane，CAM)模型及大鼠急性心肌梗死(acut

3、e myocardialinfarction，AMI)模型，觀察應(yīng)用MOO后CAM與大鼠AMI后缺血心肌血管生成的情況。從治療性血管生成的角度闡述巴戟天對心血管的保護作用，探討其機制，并為今后進(jìn)一步深入研究和探討巴戟天在心血管方面的作用奠定基礎(chǔ)。 方法： 1．MOO含藥血清的制備 16只Wistar大鼠隨機分為MOO小、中、大劑量組及空白血清組，每組4只。采用4d灌胃法，每d分別按0.7/kg、1.4/kg、2.8g/

4、kg灌胃巴戟天醇提物水溶性部分及等容積的生理鹽水(normal saline，NS)，末次灌胃1h后，腹主動脈取血，分別制備MOO小、中、大劑量含藥血清及空白血清。 2.MOO促CAM血管生成的實驗 60只雞胚隨機分為NS組、空白血清組、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)組及MOO小、中、大劑量組，每組10只。孵育7d后建立CAM模型，將NS、空白血清、bFGF(2

5、500U/ml)、MOO小、中、大劑量含藥血清分別加在CAM表面的載體上，繼續(xù)孵育3d后制備CAM標(biāo)本，體視顯微鏡下觀察血管生成表現(xiàn)，并進(jìn)行一二級血管計數(shù)。 3.MOO促AMI后大鼠缺血心肌血管生成的實驗 40只雄性Wistar大鼠，結(jié)扎冠狀動脈左前降支，制成急性心肌梗死(AMI)模型，隨機分為模型組，麝香保心丸組，MOO小、中、大劑量組，每組8只。另取10只設(shè)為假結(jié)扎組。其中麝香保心丸組造模后每d按30 mg/kg香保心丸懸

6、濁液灌胃；MOO小、中、大劑量組造模后每d按0.7g/kg、1.4g/kg、2.8g/kg灌胃巴戟天醇提物水溶性部分；模型組造模后每d灌胃與治療組同等容積的生理鹽水。假結(jié)扎組術(shù)后不進(jìn)行任何處理，常規(guī)飼養(yǎng)。各治療組均于造模后24 h內(nèi)開始藥物干預(yù)。6w后處死，心肌取材，石蠟包埋切片，行一般組織形態(tài)學(xué)觀察，檢測各組大鼠缺血心肌中微血管密度(MVD)，以及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)蛋白的表達(dá)，用病理圖像分

7、析系統(tǒng)測定生長因子蛋白表達(dá)光密度值，并進(jìn)行半定量分析。 結(jié)果： 1.CAM血管生成表現(xiàn) NS組、空白血清組血管生成表現(xiàn)均無特異性，或特異性放射狀程度低。bFGF組和MOO含藥血清組主干血管向載體物靠攏，中小血管明顯增生，尤其是小血管以載體為中心呈輻射狀生長。 2.MOO含藥血清對CAM一級、二級血管生成的影響與空白血清組相比，MOO小、中、大劑量組一、二級血管數(shù)目顯著增加(P<0.05)，但藥效均弱于bFGF

8、組(P<0.05)；與MOOdJ、劑量組相比，中、大劑量組一、二級血管數(shù)顯著增加(P<0.05)，但兩者之間無顯著性差異。NS組與空白血清組一、二級血管數(shù)目之間無顯著性差異(P>0.05)。 3.心肌切片一般組織形態(tài)學(xué)觀察假結(jié)扎組、模型組、麝香保心丸組、MOO小、中、大劑量組均可看到新生的毛細(xì)血管。假結(jié)扎組可見毛細(xì)血管增生不明顯；模型組可見少量毛細(xì)血管增生；：MOO小、中劑量組可見較多增生的毛細(xì)血管；麝香保心丸組和MOO大劑量組

9、可見多數(shù)增生的毛細(xì)血管。 4．MOO對AMI后大鼠缺血心肌MVD的影響與假結(jié)扎組相比，模型組大鼠MVD顯著增多(P<0.05)。與模型組相比，MOO中、大劑量組能顯著增加MVD(P<0.05)，但作用均弱于麝香保心丸組(P>0.05)；MOO小劑量組MVD雖多于模型組，但兩者之間無顯著性差異(P>0.05)。MOO3個劑量組之間MVD均有顯著性差異(P<0.05)。 5．MOO對AMI后大鼠缺血心肌VEGF、bFGF

10、蛋白表達(dá)的影響與假結(jié)扎組相比，模型組、麝香保心丸組、MOO小、中、大劑量組大鼠缺血心肌VEGF、bFGF光密度值顯著增高(P<0.05)；其中麝香保心丸組增高最明顯，與其余各組均有顯著性差異(P<0.05)。與模型組相比，MOO中、大劑量組能顯著增加VEGF、bFGF光密度值(P<0.05)，但作用均弱于麝香保心丸組(P>0.05)；MOO小劑量組VEGF、bFGF光密度值與模型組無顯著性差異(P>0.05)。MOO中、大劑量組bFGF