組織因子在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其促血管生成作用的研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文組織因子在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其促血管生成作用的研究姓名：關(guān)明申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師：呂元20030401復(fù)旦大學(xué)博士研究生畢業(yè)論文組織因于在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其促血管生成作用的研究瘤細(xì)胞變得有轉(zhuǎn)移性。盡管有越來(lái)越多的報(bào)道腫瘤與TF之問(wèn)的關(guān)系，甚至TF被某些學(xué)者認(rèn)為是可媲美前列腺特異抗原(prostatespecificantigen，PSA)、癌胚抗原(carcinomaembryonicanti

2、gen，CEA)的腫瘤標(biāo)志物之一，然而直到現(xiàn)在人們還不清楚TF是如何促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)TF是不是通過(guò)促進(jìn)VEGF的表達(dá)來(lái)表現(xiàn)其促血管生成活性的TF對(duì)其他血管因子是如何調(diào)節(jié)的膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見(jiàn)的原發(fā)性腫瘤，占中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的l／3，其惡性表型以局部侵襲和血管生成為主要特征。腫瘤的血管生成與轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)有密切的聯(lián)系，也是評(píng)估預(yù)后的一個(gè)指標(biāo)。因此血管化是膠質(zhì)瘤從晚期到浸潤(rùn)、侵襲這一階段必不可少的環(huán)節(jié)，綜觀近年來(lái)TF的研究進(jìn)展和趨勢(shì)，我們發(fā)現(xiàn)目前國(guó)

3、內(nèi)外尚未見(jiàn)對(duì)膠質(zhì)瘤中TF的表達(dá)與腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、血管生成的關(guān)系及其機(jī)制的探討的研究報(bào)道。鑒于TF在腫瘤中的作用的研究日益深入，有必要對(duì)膠質(zhì)瘤中的TF的表達(dá)和其可能扮演的角色作一研究。(1)檢測(cè)TFmRNA的熒光定量PCR方法建立不斷有證據(jù)顯示TF在許多腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，并在腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移中具有重要的作用。熒光定量PCR技術(shù)是近年來(lái)涌現(xiàn)的定量mRNA的新技術(shù)，然而有關(guān)TF基因的熒光定量PCR測(cè)定方法還未見(jiàn)報(bào)道。本研究基于TaqMan熒光

4、探針技術(shù)，建立了實(shí)時(shí)RTPCR方法來(lái)檢測(cè)TF的表達(dá)。構(gòu)建了含有TF片段的質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)模板，通過(guò)熒光強(qiáng)度達(dá)到一定閩值時(shí)的循環(huán)數(shù)來(lái)定量起始模板。本方法動(dòng)態(tài)檢測(cè)范圍為103～108拷92／ggRNA(r2一099)，對(duì)低值的批內(nèi)、批間的重復(fù)性分別為162％fin200％，高值分別為63％和102％，這種方法簡(jiǎn)單、快速，比傳統(tǒng)的Northernblot和競(jìng)爭(zhēng)PCR法更優(yōu)越，適用于大規(guī)模的I臨床應(yīng)用。(2)TF在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)和血管生成的關(guān)系在許

5、多惡性實(shí)體瘤中也發(fā)現(xiàn)TF的表達(dá)與惡性級(jí)別密切相關(guān)，TF表達(dá)似乎也是這些腫瘤中血管浸潤(rùn)的一個(gè)標(biāo)志物。然而TF在膠質(zhì)瘤的表達(dá)與血管浸潤(rùn)的關(guān)系還不清楚。通過(guò)免疫熒光和實(shí)時(shí)熒光定量PCR研究34例不同惡性分級(jí)的膠質(zhì)瘤、5例正常人腦組織和U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中TF的蛋白、基因表達(dá)水平，并采用血管性假性血友病因子(yonWillebrandfactorvWF)作為內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物來(lái)檢測(cè)微血管密度。無(wú)一例正常組織表達(dá)TF。90％的IV級(jí)腫瘤、58％的I