Toll樣受體4在腦膠質瘤細胞中的表達及其作用研究.pdf

1、目的:本研究擬檢測TLR4在膠質瘤細胞中的表達，探討TLR4對膠質瘤細胞生物學活性的影響。
　　方法:
　　1、采用RT-PCR方法檢測膠質瘤細胞株U251-MG中TLR4的mRNA表達情況。
　　2、采用Western Blot方法檢測U251-MG細胞中TLR4的蛋白表達情況。
　　3、構建TLR4 siRNA重組質粒，轉染至U251-MG細胞。采用RT-PCR方法檢測基因轉染后U251-MG細胞中TLR4的

2、mRNA表達情況。
　　4、采用Westem Blot方法檢測基因轉染后U251-MG細胞中TLR4的蛋白表達情況。
　　5、采用流式細胞分析技術檢測TLR4基因沉默前后對膠質瘤細胞周期的影響。
　　6、采用MTT實驗檢測TLR4基因沉默前后膠質瘤細胞的增殖活性。
　　7、采用ELISA法檢測TLR4基因表達沉默前后膠質瘤細胞培養(yǎng)上清中IL-6、IL-10和VEGF含量變化。
　　結果:
　　1、RT

3、-PCR實驗結果顯示，在膠質瘤細胞U251-MG中可檢測到TLR4mRNA表達。
　　2、Westem Blot實驗結果顯示，在膠質瘤細胞U251-MG中可檢測到TLR4蛋白表達。
　　3、將TLR4 siRNA重組質粒轉染U251-MG細胞后，檢測TLR4的mRNA表達情況，結果顯示，轉染TLR4 siRNA質粒24h后，U251-MG細胞中TLR4 mRNA表達水平(0.138±0.0004)比轉染空載體組(1.003±

4、0.0005)、未轉染組(1.034±0.0006)顯著降低(P＜0.01)。轉染空載體組與未轉染組之間差異無統(tǒng)計學意義。
　　4、將TLR4 siRNA重組質粒轉染U251-MG細胞后，檢測TLR4的蛋白表達情況，結果顯示，與轉染空載體組(0.900±0.0062)、未轉染組(1.007±0.0029)相比，轉染TLR4 siRNA基因24h后，U251-MG細胞中TLR4蛋白表達水平(0.200±0.0042)顯著降低(P＜0

5、.05）。轉染空載體組與未轉染組之間差異無統(tǒng)計學意義。
　　5、流式細胞分析結果顯示，未轉染、轉染空載體和轉染TLR4 siRNA的U251-MG細胞，經10μg/ml LPS作用48h，與未經LPS作用時相比，三組細胞S期細胞比例均明顯增高，G0/G1期細胞比例下降(P＜0.05);在LPS刺激情況下，轉染TLR4 siRNA組細胞與未轉染組和轉染空載體組細胞相比，S期細胞比例顯著降低，G0/G1期細胞比例增高（P＜0.05）。

6、
　　6、MTT實驗結果顯示，經10μg/ml LPS刺激后，與未轉染組和轉染空載體組相比，轉染TLR4 siRNA組細胞增殖率顯著降低（P＜0.05）。
　　7、ELISA實驗結果顯示，經10μg/ml LPS作用12h后，與未轉染組和轉染空載體組相比，轉染TLR4 siRNA組U251-MG細胞分泌IL-6，IL-10，VEGF的含量明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結論:膠質瘤細胞U251-MG表