益氣活血中藥延緩血管老化的作用與機制研究.pdf

1、隨著二十一世紀的到來,人口老齡化已成為影響人類發(fā)展的重要問題之一。老齡人群具有心血管疾病發(fā)病率高的特點,高血壓、冠心病、心功能不全等心血管疾病發(fā)生率隨增齡急劇上升,在這些心血管疾病中存在著明顯的心血管老化的表現(xiàn)。因此,針對這一龐大的老齡人群,研究心血管衰老,即隨著增齡心血管系統(tǒng)結構和功能發(fā)生的特征性改變將成為熱點。人參、三七、川芎屬于中藥益氣活血藥范疇,中醫(yī)學認為其有“延年不老”的功效?，F(xiàn)代藥理學研究顯示,3種藥物的有效成分與抗衰老作用

2、密切相關。本研究以血管老化為研究對象,觀察血管壁結構和功能的變化,闡明益氣活血中藥延緩血管老化的細胞和分子機制,為中藥延緩血管老化提供實驗依據(jù)。
　　 本論文分為三部分:文獻綜述、基礎研究和臨床文獻系統(tǒng)評價。
　　 1.文獻綜述通過對87篇文獻的閱讀、整理和總結,探討和綜述了細胞衰老與血管老化的關系及其研究進展,并對中醫(yī)學對衰老和血管老化的認識進行了初步總結,提出今后中醫(yī)藥研究血管老化的方向。
　　 2.基礎研究

3、包括以下三個基礎實驗:
　　 實驗一:益氣活血中藥延緩衰老小鼠血管老化的實驗研究
　　 目的:探討衰老小鼠血管老化所導致的血管壁結構和功能的改變以及益氣活血中藥人參、三七、川芎提取物的干預作用。方法:建立自然衰老小鼠模型,小鼠分為衰老模型組、人參三七川芎提取物高、中、低劑量組、維生素E組(VitE組)、另設青年對照組,觀察各組主動脈形態(tài)學改變,檢測血漿血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)含量、血管組織抗超氧陰離子、晚期糖基化終末產(chǎn)物

4、(AGEs)、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)與其抑制劑(TIMP-2)以及兩者之比MMP-2/TIMP-2。結果:人參三七川芎提取物能夠改善衰老小鼠主動脈形態(tài)學衰老變化,降低血管組織中活性氧的生成,減少AGEs生成,抑制MMP-2的活性,調(diào)節(jié)MMP-2/TIMP-2的平衡。結論:人參三七川芎提取物能降低衰老小鼠血管的僵硬度、減少血管重構,延緩小鼠血管老化的發(fā)生。
　　 實驗二:益氣活血中藥延緩.AngⅡ誘導內(nèi)皮細胞衰老的機制研究<

5、br>　　 目的:觀察AngⅡ誘導的內(nèi)皮細胞(HUVECs)衰老的病理變化,以及人參、三七、川芎提取物的干預作用和機制。方法:體外培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞加入終濃度為10-6mol/L AngⅡ誘導細胞衰老,造成內(nèi)皮細胞衰老模型。細胞分為空白對照組、AngⅡ衰老模型組、人參三七川芎高、低劑量組和纈沙坦組,采用SA-β-半乳糖染色法觀察細胞衰老改變,流式細胞儀分析細胞周期,激光共聚焦顯微鏡觀察細胞內(nèi)活性氧(ROS)含量,硝酸還原酶法檢測培養(yǎng)液一氧

6、化氮(NO)和抗超氧陰離子水平,western-blot方法檢測各組細胞AngⅡ1型和2型受體(AT1R和AT2R)、NAD(P)H氧化酶p47phox的蛋白表達。結果:高、低劑量中藥處理后改善了細胞的衰老狀態(tài),β-gal染色陽性細胞數(shù)減少,G0-G1期細胞減少,G2-M期細胞增加,ROS熒光強度減弱,抗超氧陰離子、NO含量較.AngⅡ衰老模型組增加,p47phox蛋白表達下調(diào),AT1R蛋白表達較AngⅡ衰老模型組上調(diào)。結論:人參三七川

7、芎提取物能夠延緩AngⅡ誘導的HUVECs衰老,可通過AT1R下調(diào)NAD(P)H氧化酶p47phox表達,進而使ROS產(chǎn)生減少,達到延緩內(nèi)皮細胞衰老的目的。
　　 實驗三:益氣活血中藥延緩內(nèi)皮細胞復制性衰老的機制研究
　　 目的:觀察內(nèi)皮細胞復制性衰老的病理變化,以及人參、三七、川芎提取物的干預作用和機制。方法:體外培養(yǎng)的HUVECs傳至第8代,造成內(nèi)皮細胞復制性衰老模型。細胞分為8代衰老模型組、人參三七川芎提取物高、低

8、劑量組、Vit E組,采用SA—β-gal染色法觀察細胞衰老改變,流式細胞儀分析細胞周期,激光共聚焦顯微鏡觀察細胞內(nèi)ROS含量,硝酸還原酶法檢測培養(yǎng)液NO和抗超氧陰離子水平,western-blot方法檢測各組細胞.AT1R和AT2R,NAD(P)H氧化酶p47phox的蛋白表達。結果:高、低劑量中藥處理后,β-gal染色陽性細胞數(shù)減少,G1-G1期細胞減少,G2-M期細胞增加,ROS熒光強度減弱,抗超氧陰離子、NO含量較8代衰老模型組

9、增加,p47phox,AT1R,AT2R蛋白表達下調(diào),差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)。結論:人參三七川芎提取物能夠延緩內(nèi)皮細胞復制性衰老,通過活性氧途徑下調(diào)NADPH氧化酶p47phox的表達,最終使ROS產(chǎn)生減少,可能是其延緩內(nèi)皮細胞衰老的主要因為之一。
　　 3.臨床文獻系統(tǒng)評價中國人群中老年人冠心病與血管老化相關指標關系的Meta分析
　　 目的:對中國人群中老年人冠心病與血管老化相關指標關系進行系統(tǒng)評價。方

10、法:①以[(冠心病)and(全部檢索條目:踝臂指數(shù)or脈搏波速度or脈壓差or IMT)]的檢索式檢索中國生物醫(yī)學文獻光盤數(shù)據(jù)庫,年限為1994年1月至2008年12月。②由2位研究者按照文獻納入、排除標準獨立進行文獻篩選,意見不同者通過討論解決。③獲取文獻的相關研究特征資料,并加以評價。④對合格的病例對照試驗,進行定量的Meta分析。結果:①共檢索到44個文獻。②經(jīng)兩次篩選,剔除不符合要求以及重復報道的文獻,最終共有14篇文獻入選評價