一種新的蜜蜂細(xì)菌性幼蟲病的病原鑒定與藥物防治.pdf

1、蜜蜂細(xì)菌性幼蟲病是嚴(yán)重危害蜜蜂正常生長(zhǎng)發(fā)育的傳染性疾病，對(duì)養(yǎng)蜂生產(chǎn)和蜂產(chǎn)品質(zhì)量安全構(gòu)成重大威脅。本研究論文對(duì)2005年浙江省慈溪、富陽、江山等地蜂場(chǎng)發(fā)生的一種新的蜜蜂細(xì)菌性幼蟲病的病原進(jìn)行了分離和鑒定，并開展了該病原菌的藥物敏感性試驗(yàn)研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果分述如下： 1、在浙江省慈溪、富陽、江山等地采集自然發(fā)病的蜜蜂幼蟲樣品，通過J培養(yǎng)基、EFB培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基上細(xì)菌的分離純化，結(jié)果從15份發(fā)病幼蟲樣品中共分離得到了5種細(xì)菌純培養(yǎng)物，

2、取其代表菌株分別標(biāo)記為L(zhǎng)1、L2、L3、L4、L5，其中L2在每份幼蟲樣品中都分離得到。 2、分離到的5種細(xì)菌純培養(yǎng)物，在實(shí)驗(yàn)室通過人工培育的蜜蜂幼蟲進(jìn)行致病性測(cè)定。結(jié)果接種L2的幼蟲，在接種后第2天開始發(fā)病，與對(duì)照組相比，發(fā)病幼蟲生長(zhǎng)緩慢，蟲體失去光澤，有些幼蟲腐爛，五天后大部分死亡，3天及5天后平均死亡率分別達(dá)60.00％和93.33％，均顯著高于對(duì)照組；而接種其他四種菌株的幼蟲，在觀察期間雖有死亡，但是沒有出現(xiàn)上述發(fā)病癥狀

3、，其死亡率與對(duì)照組相比，無論是3天后還是5天后，均沒有顯著差異。取接種引起的發(fā)病幼蟲進(jìn)行細(xì)菌平板分離，結(jié)果又得到了與L2菌落形態(tài)和菌體形態(tài)相同的細(xì)菌純培養(yǎng)物。 3、實(shí)驗(yàn)室篩選出的具有致病性的菌株L2，通過蜂群接種實(shí)驗(yàn)再次對(duì)其致病性進(jìn)行鑒定。結(jié)果從接種完L2菌株后的第二天開始，在實(shí)驗(yàn)組的15群蜜蜂中出現(xiàn)了不同程度的發(fā)病，發(fā)病癥狀跟自然發(fā)病癥狀基本相同，而對(duì)照組的15群蜜蜂中則沒有出現(xiàn)異樣；分別在接種前和接種后12天進(jìn)行定群，實(shí)驗(yàn)組

4、接種前后蜂群封蓋子、群勢(shì)、幼蟲數(shù)量的差異極顯著，而對(duì)照組則沒有明顯差異。取接種引起的發(fā)病幼蟲進(jìn)行細(xì)菌平板分離，結(jié)果又得到了與L2菌落形態(tài)和菌體形態(tài)相同的細(xì)菌純培養(yǎng)物。由此得出結(jié)論：L2是該蜜蜂幼蟲病的一種病原菌。 4、L2通過觀察細(xì)菌形態(tài)特征、生理生化特征以及分析16SrRNA基因序列等方法進(jìn)行種屬鑒定。結(jié)果，L2的形態(tài)特征以及生理生化特征都與腸球菌屬的屎腸球菌相符。通過16SrRNA序列比對(duì)，發(fā)現(xiàn)與它匹配度最高的5種序列也均是

5、屎腸球菌(E.faecium)各株系的16SrRNA序列，其匹配度均高達(dá)99％以上；采用DNAstar軟件將獲得的序列與腸球菌屬的41個(gè)種的代表菌株的相應(yīng)序列進(jìn)行同源性比較，以E.coli為外群進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析，結(jié)果，在L2與腸球菌屬的41個(gè)種的代表菌株的進(jìn)化樹上，L2菌株與該41種菌株的同源性在93.9％-99.5％之間，其中與E.faecium的同源性最高，達(dá)99.5％，在所構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹上，L2菌株與E.faecium的距離最近

6、。綜合細(xì)菌形態(tài)特征、生理生化特性以及16SrRNA序列等方面，可以得出結(jié)論：L2屬于腸球菌屬的屎腸球菌(E.faecium)。 5、通過測(cè)定抑菌圈大小，對(duì)從樣品中分離到的屎腸球菌進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，結(jié)果：在3種王漿組分中，組分2對(duì)該菌有較強(qiáng)的抑制作用，而組分1和組分3對(duì)該菌無抑制作用。在18種中草藥中，大蒜、大青葉、百蕊草、山楂、五倍子、甘草的抑菌效果明顯，良姜、白術(shù)、白頭翁、黃連次之；黃芪、金銀花、龍膽紫、大黃、板藍(lán)根、黃芩、