血必凈注射液對(duì)膿毒癥大鼠急性肺損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：觀察膿毒癥大鼠急性肺損傷模型肺臟形態(tài)學(xué)、病理學(xué)改變及核因子kappa B（NF-κB）的表達(dá)、血漿血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)濃度和血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)濃度，并觀察應(yīng)用血必凈注射液后上述指標(biāo)的變化，從蛋白C(PC)途徑、內(nèi)皮細(xì)胞損傷、炎癥因子的角度探討膿毒癥的發(fā)生機(jī)制及血必凈注射液對(duì)膿毒癥肺損傷的保護(hù)作用。
　　 方法：采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)，制備大鼠膿毒癥模型。選用健康Spragne-Dawley(SD)大鼠

2、144只，體重在200～230g之間，隨機(jī)分為4組：空白對(duì)照組(A組)24只、假手術(shù)組（B組）24只、膿毒癥組(C組)48只、血必凈治療組（D組）48只。各組動(dòng)物按術(shù)后處死時(shí)間點(diǎn)6、24、48、72小時(shí)各分為4個(gè)亞組，A組和B組的每個(gè)亞組6只大鼠，C組和D組的每個(gè)亞組12只。D組分別按CLP后0、12、24、36、48、60小時(shí)經(jīng)尾靜脈注射血必凈注射液4ml/kg。C組和B組于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)經(jīng)尾靜脈注射相應(yīng)量生理鹽水。各組大鼠自CLP術(shù)畢開

3、始計(jì)時(shí)，于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)將動(dòng)物麻醉后，經(jīng)腹主動(dòng)脈采血測(cè)定血漿TM濃度、血清TNF-α濃度，取右肺下葉行蘇木精-伊紅(HE)染色觀察形態(tài)學(xué)改變，免疫組化檢測(cè)NF-κB的表達(dá)。
　　 結(jié)果：①大鼠一般情況的觀察：B組大鼠均存活，蘇醒早，一般狀況逐漸好轉(zhuǎn)，進(jìn)食水及大便正常；剖腹未見惡臭、腸管壞死、腹腔水腫等表現(xiàn)。C組大鼠均有嚴(yán)重的膿毒癥表現(xiàn)：蘇醒延遲、逐漸出現(xiàn)精神萎靡、豎毛、活動(dòng)減少、不再扎堆取暖，進(jìn)食量減少、腹瀉及呼吸頻率加快等表現(xiàn)，2

4、4小時(shí)后出現(xiàn)死亡；剖腹有惡臭，可見血性慘液、腸管水腫粘連、盲腸腫脹壞死。D組大鼠與C組相比臨床表現(xiàn)有所減輕，死亡數(shù)有所減少。②病理觀察：A組大鼠肺呈均勻粉紅色；光鏡下組織結(jié)構(gòu)完整清晰，肺泡壁完整，肺泡腔無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，偶有少許紅細(xì)胞。B組大鼠與A組無(wú)明顯差異。C組大鼠雙肺腫脹，呈暗紅色，肺表面可見散在出血點(diǎn)及出血斑，切面含血量多，可有實(shí)變區(qū)或萎陷區(qū)；光鏡下早期肺泡壁毛細(xì)血管擴(kuò)張、瘀血、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肺水腫、彌漫肺出血及肺泡腔塌陷，部分透明

5、膜形成，后期可見肺泡塌陷明顯，肺大皰形成，病變24小時(shí)達(dá)頂峰，其后無(wú)減輕趨勢(shì)。D組大鼠較C病理?yè)p傷輕且有減輕趨勢(shì)。③血漿TM濃度：A組與B組血漿TM濃度較穩(wěn)定，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p＞0.05。C組大鼠CLP后6小時(shí)血漿TM濃度開始升高，并逐漸上升，至72小時(shí)仍無(wú)下降趨勢(shì)，與A、B組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p＜0.01。D組大鼠CLP后6小時(shí)血漿TM濃度開始升高，但比同時(shí)間點(diǎn)C組濃度低，以后逐漸降低，仍比同時(shí)間點(diǎn)B組濃度高，D組與C組及

6、A組、B組差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p＜0.01。④血清TNF-α濃度：A組與B組血清TNF-α濃度較穩(wěn)定，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。C組血清TNF-α濃度于CLP后6小時(shí)開始逐漸升高，至72小時(shí)無(wú)下降趨勢(shì)，與A組及B組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p＜0.05。D組血清TNF-α濃度在各時(shí)間點(diǎn)較C組均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p＜0.05。D組血清各時(shí)間點(diǎn)TNF-α濃度均較A組及B組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p＜0.05。⑤肺組織NF-κB表達(dá)：A

7、、B組均可見散在的NF-κB陽(yáng)性細(xì)胞；C組于CLP后6、24、48、72小時(shí)均顯著增強(qiáng)，在支氣管上皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)有表達(dá)，與A、B組比較有顯著差異，p＜0.05；D組CLP后6小時(shí)亦出現(xiàn)表達(dá)，24、48、72小時(shí)表達(dá)顯著低于C組，但仍明顯高于A、B組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p＜0.05。
　　 結(jié)論：①CLP法能夠成功復(fù)制大鼠膿毒癥肺損傷模型。②血必凈注射液可以明顯降低TNF-α和TM水平，減少肺組織NF