2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、惡性腫瘤嚴重威脅著人類的健康。目前,手術(shù)、放射治療、化療及中醫(yī)藥等綜合治療取得了很大進展,但效果仍不理想。隨著現(xiàn)代分子生物學及其相關(guān)學科的飛速發(fā)展,腫瘤基因治療將成為除手術(shù),放療和化療等傳統(tǒng)方法外又一新的抗癌策略;尤其將在傳統(tǒng)治療手段效果較差的腫瘤轉(zhuǎn)移和復發(fā)方面將起重要作用?;蛑委熤两裆形闯蔀榕R床常規(guī)治療措施,其關(guān)鍵原因之一就是缺乏高效靶向基因?qū)胼d體。表皮生長因子受體(EGFR)由于在乳腺癌中有高表達,而在正常乳腺組織中表達水平較低

2、,因此是一個很好的靶點。本研究旨在建立一種靶向EGFR受體的基因?qū)胂到y(tǒng)并檢驗其有效性,為乳腺癌的靶向性基因治療提供可靠的理論依據(jù)與實踐指導。 通過表皮生長因子受體(EGFR)介導增加癌細胞對表皮生長因子(EGF)偶聯(lián)納米載體所載的藥物、抗體、基因等的攝取,提高所載藥物、抗體、基因等的靶向性。本課題研究制備高穩(wěn)定性和高靶向性的納米載體,并荷載靶向基因,在腫瘤的診斷治療中,以達到更好的靶向性。 方法: 1.BSA納米

3、載體與EGF偶聯(lián)BSA納米載體的制備及放射性核素的標記及鑒定 采用二次超聲乳化技術(shù)和溶劑揮發(fā)技術(shù)制備牛血清白蛋白納米載體(bovine serum albumin nano-carrier,BSA nano-carrier),采用激光粒徑儀測定納米粒的粒徑和分布,用透射電鏡觀察納米粒的形態(tài)。采取Iodogen將131I標記上BSA nano-carrier,再用Sephadex G25柱層析進行純化,硅膠薄層層析測定標記率、比活

4、度及放射化學純度。分別測定131I-BSA nano-carrier室溫和與新鮮人血清37℃孵育后放射化學純度的變化,了解其在室溫和血清中的穩(wěn)定性。 采用化學方法連接BSA nano-carrier與EGF,測定連接后的粒徑及粒徑分布,Sephadex G50分離純化EGF-BSA nano-carrier。聚丙烯酰胺凝膠電泳法鑒定EGF-BSA nano-carrier的連接情況,用131I標記EGF測定EGF-BSA nan

5、o-carrier上EGF的偶聯(lián)量。 2.131I-EGF-BSA靶向納米載體導入荷乳腺癌裸鼠的體內(nèi)分布 分別比較131I標記EGF偶聯(lián)BSA納米載體,BSA納米載體和BSA(非納米載體)在乳腺癌SK-BR3細胞導入裸鼠的體內(nèi)分布。通過統(tǒng)計分析比較各器官的瘤/血比值和瘤/肌肉比值。 3.表皮生長因子受體靶向納米載體荷載c-erbB2反義寡脫氧核苷酸對人乳腺癌SK-BR3細胞的攝取與滯留 采取氯胺T法將13

6、1I標記c-erbB2反義寡脫氧核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotide,ASODN),采用包裹法對131I標記ASODN進行EGF偶聯(lián)納米載體包載。分別測量荷131I標記ASODN nano-carrier和131I-ASODN在人乳腺癌SK-BR3細胞的攝取率和滯留率及在荷人乳腺癌裸鼠的體內(nèi)分布,并統(tǒng)計分析荷131I標記ASODN靶向納米載體與131I標記ASODN在體內(nèi)各器官的分布及瘤/血比值和瘤/肌肉

7、比值。 結(jié)果: 1.BSA納米載體與EGF偶聯(lián)BSA納米載體的制備及放射性核素的標記及鑒定 1.1, BSA納米載體的制備及鑒定 用透射電鏡進行觀察,納米載體的形態(tài)圓整,大小粒徑較均勻。采用激光散射法測定的BSANP平均粒徑為34nm,90%的粒徑小于38nm。 131I-BSANP的131I標記率為92.3%±3.9%,比活度為(3.1±0.7)MBq/μg。Sephadex G25分離純化得到

8、的第1放射峰即為131I-BSANP,經(jīng)24h穩(wěn)定性分析,其放射化學純度略有降低,但24h均值大于80%。與新鮮人血清37℃孵育分析其穩(wěn)定性,經(jīng)紙層析分析測得放射化學純度4h比1h略有降低,但4h均值大于85%。 -20℃保存1d后BSANP的131I標記率為(89.7±6.4)%,15d為(86.2±5.7)%,30d為(84.3±5.2)%,90d后為(81.2±5.5)%。 1.2, EGF偶聯(lián)BSA納米載體的制備

9、及鑒定 SDS-PAGE電泳顯示,BSA nano-carrier樣品電泳條帶與Marker68kU接近,而EGF-BSA nano-carrier樣品電泳條帶與Marker75kU接近。 加入5組不同量的EGF與BSA nano-carrier的偶聯(lián)率為92.3%~98.9%。室溫穩(wěn)定性測定,在1h、6h、12h和24h同一時間點,組內(nèi)無顯著性(P>0.05),同組在24h內(nèi)放化純度差異有顯著意義(P<0.05),做

10、回歸分析,F(xiàn)值為30.46時間與放射純度呈線性相關(guān),回歸方程為Y=99.37-3.451X,R2為0.942,n=3。結(jié)果顯示,131I-EGF-BSAnano-carrier在中性pH溶液中,室溫24h內(nèi)具有較好的穩(wěn)定性,131I不易脫落。血清穩(wěn)定性,在1h、6h、12h和24h同一時間點,組內(nèi)無顯著性(P>0.05),在24h內(nèi)放化純度差異有顯著意義(P<0.05),做回歸分析F值為87.98時間與放射純度呈線性相關(guān),回歸方程為Y=

11、99.86-4.156X,R2為0.981,n=3。結(jié)果顯示,131I-EGF-BSA nano-carrier在血清中,24h內(nèi)具有較好的穩(wěn)定性,131I不易脫落。 2.131I標記EGF偶聯(lián)BSA靶向納米載體在荷乳腺癌裸鼠的體內(nèi)分布 131I標記EGF偶聯(lián)BSA靶向納米載體的放射性瘤/血比值和瘤/肌肉比值逐漸升高,在2h達峰值,后略有下降。131I-BSA nano-carrier放射性的瘤/血比值和瘤/肌肉比值升降

12、趨勢與131I標記EGF偶聯(lián)BSAnano-carrier相似,但同一時間點的放射性瘤/血比值和瘤/肌肉比值均相對較低。將131I標記EGF偶聯(lián)BSA nano-carrier,131I標記BSA納米載體和131I-BSA(非納米)的瘤/血比值做方差分析:各藥物組間均方MS=3.203,F(xiàn)=14.86,R2=0.725,p<0.01,三種藥物的瘤/血比值有統(tǒng)計學差異。三種藥物瘤/肌肉比值做方差分析:各藥物組間均方MS=15.814,F(xiàn)=

13、6.443,R2=0.403,p=0.005,p<0.01,三種藥物的瘤/肌肉比值有統(tǒng)計學差異。 131I-EGF-BSA nano-carrier對裸鼠體內(nèi)的人乳腺癌SK-BR3腫瘤具有較好的靶向性,而在肝,脾,肺等正常組織器官的分布較少,表明新的納米載體靶向性較好,而且毒副作用較低。 3.表皮生長因子受體靶向納米載體荷載c-erbB2反義寡脫氧核苷酸對人乳腺癌SK-BR3細胞的攝取與滯留 c-erbB2反義

14、寡脫氧核苷酸(c-erbB2 antisense oligodeoxynucleotide,c-erbB2 ASODN以下簡稱ASODN)聯(lián)合EGF偶聯(lián)BSA nano-carrier與ASODN組的放射性瘤/血比值和瘤/肌肉比值升降趨勢相似,但同一時間點,ASODN組的放射性瘤/血比值和瘤/肌肉比值均相對較低。將ASODN聯(lián)合EGF-BSA nano-carrier靶向納米載體與ASODN組放射性的瘤/血比值做t檢驗:Levene's

15、方差齊性檢驗:F=67.207,方差齊,t=5.092,p<0.05,差異有顯著性。將ASODN聯(lián)合EGF偶聯(lián)BSA nano-carrier靶向納米載體與ASODN組的放射性瘤/肌肉比值做t檢驗:Levene's方差齊性檢驗:F=32.92,方差齊,t=9.477,p<0.01,差異有顯著性。ASODN聯(lián)合EGF-BSA nano-carrier靶向納米載體組較ASODN組的瘤/血比值和瘤/肌肉比值高,有統(tǒng)計學差異。 結(jié)論:由

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