痛風(fēng)飲對(duì)實(shí)驗(yàn)性急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠治療作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎(gouty arthritis)是由于尿酸鈉微結(jié)晶沉積在關(guān)節(jié)周圍組織引發(fā)的急性炎癥反應(yīng)，以關(guān)節(jié)紅、腫、熱、痛和功能障礙為主要表現(xiàn)，臨床常反復(fù)發(fā)作，日久可導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形。目前國內(nèi)諸多學(xué)者在中醫(yī)方藥治療痛風(fēng)方面取得了一定的成果，但是縱觀國內(nèi)外文獻(xiàn)資料，并未見1劑中藥即取得顯著治療效果的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)Coderre介紹的尿酸鈉誘導(dǎo)的大鼠足腫脹模型略作改進(jìn)，通過觀察西藥秋水仙堿與中藥痛風(fēng)飲1劑對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠的患肢壓力積分

2、、步態(tài)、足腫脹度，白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、尿酸、白細(xì)胞介素-1β、白細(xì)胞介素-6在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠血清中的表達(dá)，以及對(duì)病理結(jié)構(gòu)的影響，探討中藥痛風(fēng)飲1劑在治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎中的藥理作用，為中藥治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： (1)選用48只Wistar大鼠，隨機(jī)分成4組，每組12只，分別為空白對(duì)照組(Normal control group，N)，秋水仙堿陽性對(duì)照組(Colchicine group，C)，中藥

3、痛風(fēng)飲治療組(Tongfengyin group，T)，模型組(Model group，M)。其中C、T、M組均于右踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注入尿酸鈉混懸液(MSU)0.2ml制作模型，N組于右踝關(guān)節(jié)腔注入等量生理鹽水作為對(duì)照。于造模后24h大鼠灌服給藥，根據(jù)人用藥量與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用藥的換算公式，計(jì)算出大鼠的用藥量，C組按0.135mg/kg·d，T組按13.5g/kg·d劑量灌胃，所有藥物分兩次灌胃，共灌胃治療1天。N組、M組均與C組、T組同一時(shí)間灌服

4、等量生理鹽水作為對(duì)照。(2)于造模后24h、治療后24h觀察大鼠的一般表現(xiàn)及關(guān)節(jié)炎癥表現(xiàn)，并做患肢壓力及步態(tài)積分；分別于造模前、造模后24h、治療后24h測量右踝周徑，計(jì)算踝周徑變化值；治療后24h斷頭取血，用計(jì)數(shù)盤法進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)，涂血片，染色，做白細(xì)胞人工分類，離心分離血清，備用，采用酶比色法測血清尿酸(UA)水平，采用放免法測血清IL-1β、IL-6水平。(3)處死大鼠后，取右踝關(guān)節(jié)組織，用10％甲醛固定，石蠟包埋，行蘇木素-伊紅

5、(HE)染色，光鏡下觀察滑膜、炎性白細(xì)胞浸潤、毛細(xì)血管腔大小等病理變化，并采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)，進(jìn)行照相。(4)計(jì)量資料應(yīng)用SPSS11.5 for Windows統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，方差不齊的計(jì)量資料和等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)。結(jié)果： 1.一般行為觀察實(shí)驗(yàn)造模期間，N組大鼠雙眼靈活有神，行動(dòng)敏捷，對(duì)周圍變化反應(yīng)靈敏；C、T、M組大鼠在給予致炎后出現(xiàn)致炎足踝腫脹，走路不穩(wěn)，患足不能著地，蜷臥患足朝上

6、；C組和T組經(jīng)治療后，精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)，足腫脹減輕，跛行好轉(zhuǎn)。 2.痛風(fēng)飲對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠站立及行走時(shí)患肢壓力積分值、右踝周徑的影響2.1 造模后大鼠站立及行走時(shí)患肢壓力積分值C組、T組、M組的大鼠站立及行走時(shí)患肢壓力積分值均較N組明顯升高(P<0.01)。 2.2造模后大鼠右踩周徑的變化C組、T組、M組大鼠的右踝周徑變化值較N組右踝周徑變化值明顯升高(P<0.01)。 2.3治療后對(duì)大鼠站立及行走時(shí)患肢壓力積分值的影響C

7、組、M組與N組相比大鼠的患足積分值仍明顯升高(P<0.01)；T組與M組相比，患足積分值降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 2.4治療后大鼠右踝周徑的變化T組較M、N組踝周徑變化具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；C組與T組之間踝周徑變化不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；C組與M組相比不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但其踝周徑變化有較好的趨勢。 3.痛風(fēng)飲對(duì)白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞百分比的影響M組大鼠白細(xì)胞明顯高于C組、T組

8、、N組(P<0.01)，三組之間無明顯差異(P>0.05)。 C組、T組與M組相比中性粒細(xì)胞比例下降(P<0.01)；T組與N組相比中性粒細(xì)胞比例無顯著性差異(P>0.05)。 4 痛風(fēng)飲對(duì)大鼠血漿IL-1β、IL-6的影響C組、T組血漿中IL-1β水平與N組相比無顯著性差異(P>0.05)；M組與N組、T組相比IL-1β水平明顯升高(P<0.01)；C組與T組相比無顯著性差異(P>0.05)。 C組、T組、M組

9、血漿中IL-6水平與N組相比明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；M組與C、T組相比明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；C組與T組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 5 痛風(fēng)飲對(duì)大鼠血漿尿酸的影響T組與N組相比血尿酸水平升高(P<0.05)；N組、C組、M組三組間無明顯差異(P>0.05)。 6 痛風(fēng)飲對(duì)大鼠病理形態(tài)的影響正常組大鼠關(guān)節(jié)滑膜襯里層由1～2層滑膜細(xì)胞組成，且部分不連續(xù)，滑膜下層則為脂肪細(xì)胞、少量成

10、纖維細(xì)胞與血管。模型組大鼠關(guān)節(jié)滑膜襯里層細(xì)胞明顯增厚，呈“柵欄”狀排列，或不規(guī)則排列，滑膜組織呈絨毛狀或指狀肥大，襯里層細(xì)胞下的脂肪細(xì)胞減少甚至消失，并有大量成纖維細(xì)胞及膠原纖維；損傷部位及周圍可見炎細(xì)胞成堆，多形核白細(xì)胞、單核細(xì)胞、異物巨細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤；新生血管多處可見，血管腔明顯擴(kuò)張充血，痛風(fēng)飲組及秋水仙堿組與模型組相比，其炎性白細(xì)胞浸潤、血管擴(kuò)張情況均不同程度低于模型組。 結(jié)論： 痛風(fēng)飲具有良好的抑制急性痛風(fēng)性