同種反應(yīng)性NK細(xì)胞在造血干細(xì)胞移植中作用的臨床及實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：1.研究供者KIR和供受者HLA配體對(duì)單倍體造血干細(xì)胞移植(HSCT)預(yù)后的影響；2.研究供者KIR和受者HLA配體對(duì)同胞HLA相合HSCT預(yù)后的影響；3.探討異基因造血干細(xì)胞移植(allo-HSCT)中移植物和移植后一個(gè)月患者外周血NK細(xì)胞和T細(xì)胞上四種抑制型受體(CD158a、CD158b、NKB1及CD94/NKG2A)的表達(dá)與造血重建及急性移植物抗宿主病(aGVHD)的關(guān)系；4.研究同種反應(yīng)性NK細(xì)胞用于小鼠單倍體骨髓移植

2、(BMT)中的抗白血病(GVL)作用；5.探討同種反應(yīng)性NK細(xì)胞對(duì)小鼠單倍體BMT免疫重建的可能有益作用。 方法：1.采用特異性序列引物聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSP)方法進(jìn)行供者KIR及供受者HLA-Cw基因分型；2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)NK及T細(xì)胞上四種抑制型受體的表達(dá)；3.免疫磁珠分選法制備供鼠NK細(xì)胞及同種反應(yīng)性NK細(xì)胞；4.建立C57BL/6×BALB/c(BCF1)→BAL,B/c小鼠(荷EL9611紅白血病)單倍體BMT模

3、型，觀察同種反應(yīng)性NK細(xì)胞的GVL作用；5.應(yīng)用C57BL/6×BALB/c(BCFt)→BALB/c小鼠單倍體BMT模型，觀察同種反應(yīng)性NK細(xì)胞對(duì)免疫重建的可能影響：胸腺病理組織學(xué)觀查；流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血CD3e的表達(dá)：脾細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定外周血血清及脾細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-4、IFN-γ濃度。 結(jié)果：1.在單倍體HSCT中，供者KIR2DS3、KIR3DS1顯著延遲中性粒細(xì)胞重建，同時(shí)KIR3DS

4、1顯著延遲血小板重建；KIR2DS1、KIR2DS3、KIR3DS1顯著降低慢性GVHD(cGVHD)；受者HLA-Bw4陽(yáng)性顯著增加aGVHD發(fā)生率(以上各組與相應(yīng)組比較，P均<0.05)；GVH方向HLA配體不合組與相合組、KIR受體-HLA配體不合組與相合組比較，造血重建、DFS、復(fù)發(fā)、TRM沒(méi)有顯著性差別(P均>0.05)。2.在同胞HLA相合HSCT中，供者KIR2DS5顯著延遲中性粒細(xì)胞重建；KIR2DS2顯著增加aGVHD

5、和CMV病毒血癥的發(fā)生率(P均<0.05)；C1純合組與C1/C2雜合組相比，cGVHD發(fā)生率顯著降低，而且4例廣泛型cGVHD均發(fā)生在C1/C2雜合組，同時(shí)C1純合組敗血癥/肺感染的發(fā)生率顯著降低(P均<0.05)；KIR受體-HLA配體不合組DFS顯著高于相合組(移植后600天DFS分別為(88.89±7.41)％、(53.85±13.83)％，P<0.05)，同時(shí)不合組復(fù)發(fā)率有低于相合組的趨勢(shì)(P=0.08)。3.移植物NK細(xì)胞上

6、CD158a、NKB1、CD94/NKG2A的表達(dá)在II～I(xiàn)V度aGVHD組明顯高于0～I(xiàn)度aGVHD組；而CD8+T細(xì)胞上CD94/NKG2A的表達(dá)在0～I(xiàn)度aGVHD組明顯高于II～I(xiàn)V度aGVHD組(P均<0.05)。4.同種反應(yīng)性NK細(xì)胞顯著延長(zhǎng)接受單倍體BMT的荷白血病BALB/c小鼠的生存期，降低復(fù)發(fā)率(與非同種反應(yīng)性NK細(xì)胞組和單純BMT組比較，P均<0.05)。5.同種反應(yīng)性NK細(xì)胞促進(jìn)單倍體BMT小鼠的外周T細(xì)胞免疫重

7、建，體內(nèi)有效誘導(dǎo)Th1型免疫反應(yīng)的偏移。 結(jié)論：1.在單倍體HSCT中，供者激活型KIR2DS3、KIR3DS1延遲造血重建，KIR2DS1、KIR2DS3、KIR3DS1降低cGVHD；受者Bw4增加aGVHD；GVH方向HLA配體是否相合、KIR受體一配體是否相合對(duì)造血重建、DFS均無(wú)顯著影響。2.在同胞HLA相合HSCT中，供者激活型KIR2DS5延遲造血重建，KIR2DS2增加aGVHD和CMV病毒血癥的發(fā)生；C1純合狀

8、態(tài)降低cGVHD發(fā)生率和嚴(yán)重程度，降低感染；KIR受體-HLA配體不合可能降低復(fù)發(fā)，改善DFS。3.Allo-HSCT中移植物中NK細(xì)胞高表達(dá)CD158a、NKB1、CD94/NKG2A時(shí)增加II～I(xiàn)V度aGVHD，而CD8+T細(xì)胞上高表達(dá)CD94/NKG2A降低II～I(xiàn)V度aGVHD。4.同種反應(yīng)性NK細(xì)胞用于單倍體BMT的荷白血病BALB/c小鼠，延長(zhǎng)生存期，降低復(fù)發(fā)率，具有GVL的作用。5.同種反應(yīng)性NK細(xì)胞促進(jìn)單倍體BMT小鼠的