p27蛋白和細(xì)胞周期蛋白D1與外陰癌變關(guān)系的研究.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文p27蛋白和細(xì)胞周期蛋白D1與外陰癌變關(guān)系的研究姓名：李慧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：武昕20040301齡5 7 ．7 歲( 2 4 —8 0 歲) ；③外陰上皮內(nèi)瘤樣病變( V I N ) 病例3 0 例，其中V I NI1 0 例，平均年齡3 4 ．9 歲( 1 9 —5 3 歲) ，V I N Ⅱ1 0 例，平均年齡4 1 ．7 歲( 3 0一6 3 歲) ，V I N Ⅲ1 0 例，平均年

2、齡4 7 ．8 歲( 2 5 —7 0 歲) ；④對(duì)照組取正常外陰皮膚5 例，平均年齡4 5 ．6 歲( 3 l 一6 0 歲) 。2 實(shí)驗(yàn)方法2 ．1 標(biāo)本常規(guī)經(jīng)福爾馬林固定、石蠟包埋、制成4 p , m 切片、H E 染色。2 ．2 免疫組織化學(xué)方法( S P 法)標(biāo)本切片后常規(guī)脫蠟，含1 0 ％過氧化氫的甲醇溶液中浸泡l O 分鐘，蒸餾水洗3 次，每次3 分鐘。熱抗原修復(fù)，正常羊血清封閉2 0 分鐘，甩去多余液體。滴加5 0 止一

3、抗( 即用型鼠抗人C y c l i nD 1 ，或即用型鼠抗人p 2 7 抗體，購(gòu)自福建邁新生物技術(shù)有限公司) ，于室溫下孵育1 ．5 小時(shí)，P B S 液洗3次，每次5 分鐘。加入5 0 止生物素標(biāo)記的二抗( 1 ：1 0 0 生物素標(biāo)記的羊抗鼠I g G ，購(gòu)自福建邁新生物技術(shù)有限公司) ，于室溫下孵育1 0 分鐘，P B S 液洗3 次，每次3 分鐘。加入5 0 正S P 復(fù)合物于室溫下孵育2 0 分鐘，P B S 液洗4 次，

4、每次5 分鐘。D A B 顯色，常溫下2 ～8 分鐘，在顯微鏡下觀察控制顯色時(shí)間。自來水終止顯色，約5 分鐘。蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封片。以P B S液代替一抗作陰性對(duì)照。2 ．3 結(jié)果判斷C y c l i nD 1 和p 2 7 蛋白表達(dá)定位在細(xì)胞核中，出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。每個(gè)標(biāo)本隨機(jī)觀察5 個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)1 0 0 個(gè)細(xì)胞中陽性細(xì)胞的比值，取其平均值。2 ．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理各組間比較、不同臨床分期、組織細(xì)胞分化程度、組織類型C

5、 y c l i nD 1 、p 2 7 蛋白表達(dá)比較用x 2 ( C h i —S q l I 鋤) 檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理軟件S A S S y s t e m 6 ．1 1 版。結(jié) 果1 細(xì)胞分化與年齡的關(guān)系外陰鱗癌無論年齡大小均以高分化為主6 0 ％( 1 2 ／2 0 ) 。2p 2 7 和C y c l i nD 1 蛋白在各組問表達(dá)的陽性率p 2 7 蛋白在正常外陰皮膚中1 0 0 ％為陽性表達(dá)( 5 ／5 ) ，在外陰非瘤性上