細胞周期蛋白D1在支氣管哮喘氣道重塑中的作用及藥物干預研究.pdf

1、支氣管哮喘(簡稱哮喘)的發(fā)生主要與變態(tài)反應、氣道炎癥、神經(jīng)因素等相互作用有關，氣道重塑性結構改變則貫穿于疾病的發(fā)展過程始終。氣道上皮間葉區(qū)帶處平滑肌細胞、成纖維細胞等受刺激后引發(fā)一系列結構改變即為氣道重塑。氣道重塑導致肺功能日趨下降，給哮喘的治療帶來了很大的困難。目前氣道重塑的發(fā)生機制仍不十分清楚。因此，進一步研究氣道重塑的發(fā)生機制對于我們全面、深入地了解哮喘本質以及治療哮喘尤其是頑固性哮喘具有重要意義。 本研究共分為兩部分：第

2、一部分，在建立哮喘小鼠模型的基礎上，研究哮喘小鼠肺組織中細胞周期蛋白D1(CyclinD1)的表達情況，結合肺功能檢測分析CyclinD1在氣道重塑過程中的作用，并通過檢測細胞外信號調節(jié)激酶(Extracellularsignal-regulatedkinase，ERK)與CyclinD1的表達相關性，進一步探討CyclinD1在哮喘中的作用機制。第二部分，研究應用白三烯受體拮抗劑(孟魯司特鈉)干預對哮喘小鼠肺組織中CyclinD1的表

3、達影響及對哮喘氣道重塑的作用，探討白三烯受體拮抗劑在哮喘治療中的作用。 本研究探討了CyclinD1參與哮喘氣道重塑的作用及機制，主要結果如下： 1、應用雞卵清蛋白(Ovalbumin，OVA)致敏和激發(fā)BALB/c小鼠建立哮喘模型。通過檢測其病理形態(tài)學、細胞學以及病理生理學等方面的多種指標，證實模型存在哮喘及氣道重塑的特征。對支氣管肺泡灌洗液(Bronchialalveolarlavagefluid，BALF)分析提示

4、哮喘組嗜酸粒細胞絕對計數(shù)及分類計數(shù)與正常組相比較差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；應用動物肺功能儀對小鼠呼氣阻力(Re)檢測發(fā)現(xiàn)哮喘組小鼠Re較正常組為高(P＜0.05)；蘇木素伊紅(Hematoxylinandeosin，HE)染色顯示哮喘組出現(xiàn)嗜酸粒細胞浸潤增多、纖毛脫失、粘液栓形成、平滑肌細胞層增厚等改變，而正常組無上述改變；對圖像進行分析提示氣道壁厚度及平滑肌細胞面積隨霧化時間延長而增加，哮喘組與正常組相比較差異具有統(tǒng)計學意義

5、(P＜0.05)。 2、分別應用逆轉錄-聚合酶鏈反應技術(Reversetranscriptionpolymerasechainreaction，RT-PCR)、實時定量(real-time)PCR及Western-blot法來測定肺組織中CyclinD1mRNA水平表達變化及CyclinD1蛋白水平表達變化。RT-PCR和Real-timePCR檢測提示哮喘組CyclinD1的mRNA表達量顯著高于正常組(P＜0.05)，且隨

6、OVA霧化時間的延長其表達量逐漸增加；Western-blot檢測發(fā)現(xiàn)，CyclinD1在哮喘組蛋白表達量較正常組為高(P＜0.01)，與mRNA表達變化相一致。 3、通過RT-PCR法檢測ERK在各組小鼠肺組織中的表達情況，觀察ERK1/2的表達與CyclinD1的表達相關性。結果顯示，哮喘組ERK1、ERK2的mRNA水平表達量顯著高于正常組(P＜0.05)，且隨OVA霧化時間的延長其表達量也逐漸增加，與CyclinD1mR

7、NA水平表達相一致。 4、構建哮喘小鼠模型，并應用孟魯司特鈉進行干預治療。治療組每次霧化吸入OVA前30min予以孟魯司特鈉(10mg/kg)灌胃給藥。免疫組化結果顯示CyclinD1在哮喘小鼠氣道平滑肌細胞、內皮細胞、成纖維細胞中皆有表達而在對照組中表達較弱(P＜0.05)，治療組表達量低于哮喘組(P＜0.05)；RT-PCR及Westernblot檢測發(fā)現(xiàn)CyclinD1在哮喘組表達量較對照組為高(P＜0.01)，而治療組表