地龍?jiān)谙瓪獾乐厮苤械囊种谱饔?pdf

1、目的：支氣管上皮細(xì)胞通過分泌許多細(xì)胞因子及趨化因子，在哮喘氣道慢性炎癥和氣道重塑中發(fā)揮重要作用。氣道慢性炎癥和氣道重塑是哮喘顯著性特征。目前哮喘的主要治療藥物為糖皮質(zhì)激素和β2-受體激動劑等，但長期應(yīng)用副作用大、敏感性下降，因此探索能夠有效調(diào)節(jié)關(guān)鍵性細(xì)胞因子的活性，使細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)沉積與降解趨于平衡的藥物己經(jīng)成為抗氣道重塑研究的方向之一。地龍是有確切療效的抗哮喘藥物，其廣泛的藥理作用與哮喘

2、氣道重塑密切相關(guān)，本實(shí)驗(yàn)觀察地龍對屋塵螨(Dermatophagoides pteronyssinus，Derpl)抗原致敏人永生化支氣管上皮細(xì)胞系BEP2D(Human epithelial cells，HBE)及人胚肺成纖維細(xì)胞(Human embryonic lung fibroblast，HLF)影響，探討地龍?jiān)谥夤芟委熤械膬r(jià)值及可能的作用機(jī)理，為臨床治療提供新的思路。 方法：給予人永生化支氣管上皮細(xì)胞系BEP2D

3、(HBE)以不同的干預(yù)和治療，分為：單純培養(yǎng)組即對照組(A組)，Derpl抗原(10μg/ml)組(B組)，Derpl抗原(10 μg/ml)+地塞米松(Dexamethasone，DEX)(1X10-6mol/l)組(C組)，Derpl抗原(10μg/ml)+地龍注射液(0.9mg/m1)組(D組)，Derpl抗原(10μg/ml)+地龍注射液(9mg/ml)組(E組)，Derpl抗原(10μg/ml)+地龍注射液(18mg/ml)組

4、(F組)，培養(yǎng)72小時(shí)，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)實(shí)驗(yàn)檢測各組細(xì)胞白細(xì)胞介素(IL)-13(Interleukin-13，IL-13)mRNA，轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β1(Transforming growth factor-β1，TGF-β1)mRNA，Smad2 mRNA表達(dá)；并收集以上各組上清液，作用于人胚肺成纖維細(xì)胞(HLF)72小時(shí)，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測平滑肌肌動蛋白(SMA)-α(Smooth muscle ac

5、tin-α，α-SMA)，纖維粘連蛋(Fibronectin，F(xiàn)N)表達(dá)。數(shù)據(jù)分析采用SPSS13.0軟件，計(jì)量數(shù)據(jù)以±s表示，多組間比較用方差分析檢驗(yàn)，多組間的兩兩比較用q檢驗(yàn)，兩數(shù)據(jù)的相關(guān)性比較用Spearman等級相關(guān)分析。 結(jié)果： 1．Derpl對HBE細(xì)胞的形態(tài)學(xué)的影響：倒置相差顯微鏡下觀察，正常組為未加Derpl抗原，表現(xiàn)為單層細(xì)胞完全平鋪，HBE細(xì)胞在正常生長狀態(tài)下以圓形或類圓形細(xì)胞占主要份額(如圖1A箭頭

6、所示)，梭形細(xì)胞比例較少，體積較大，排列緊密；加入Derpl抗原(10μg/ml)組培養(yǎng)72h后，表現(xiàn)為細(xì)胞瘦長(如圖1B箭頭所示)，細(xì)胞間隙增大(如1三角符號所示)，即出現(xiàn)小孔。 2．IL-13，TGF-β1，Smad2等細(xì)胞因子基因水平表達(dá)各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)，B組IL-13 mRNA，TGF-β1mRNA，Smad2 mRNA表達(dá)高于A組，且差異有顯著性p<0.05)，地龍各劑量組(D、E、F組)及C組I

7、L-13 mRNA，TGF-β1mRNA，Smad2mRNA與A組存在一定差異，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)；地龍各劑量組(D、E、F組)及C組IL-13 mRNA，TGF-β1mRNA，Smad2mRNA表達(dá)受到抑制，與B組比較差異有顯著性(p<0.05)，D、E、F組與C組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。D、E、F組間雖有一定差異，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)，即不存在明顯的量效關(guān)系。 3．α-SMA，F(xiàn)N蛋白表達(dá)A、B

8、、C、D、E、F組上清液對應(yīng)HLF組分別為A1、B1、C1、D1、E1、F1組。B1組α-SMA，F(xiàn)N表達(dá)高于A1組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)，E1、F1組及C1組α-SMA，F(xiàn)N表達(dá)與A1組存在一定差異，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)；D1、E1、F1組及C1組α-SMA，F(xiàn)N表達(dá)受到抑制，與B1組比較差異有顯著性(p<0.01)，D1、E1、F1組與C1組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。 4．各檢測指標(biāo)相

9、關(guān)性分析TGFβ1mRNA與Smad2 mRNA呈正相關(guān)(rs=0.9429,p<0.05)。TGFβ1mRNA與FN蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.9429,p<0.05)。 結(jié)論： 1．屋塵螨抗原可引起人支氣管上皮細(xì)胞哮喘樣改變，表現(xiàn)為IL-13，TGF-β1，Smad2等細(xì)胞因子表達(dá)增加。 2．人支氣管上皮細(xì)胞在誘導(dǎo)氣道重塑中起重要作用，表現(xiàn)為屋塵螨抗原致敏人支氣管上皮細(xì)胞后收集上清液，作用于成纖維細(xì)胞，可引起