大鼠局灶性腦缺血再灌注后凋亡相關(guān)基因的表達(dá)及依達(dá)拉奉的干預(yù).pdf

1、背景與目的:腦缺血損傷后細(xì)胞凋亡受諸多基因調(diào)控。由死亡受體Fas所介導(dǎo)的凋亡通路主要包括Fas-FADD-Caspase-8和Fas-Daxx-ASKl兩條。其中FADD和Caspase-8在多條死亡受體介導(dǎo)的凋亡途徑中起著關(guān)鍵作用。Daxx則在基因轉(zhuǎn)錄和細(xì)胞凋亡兩方面發(fā)揮重要作用。FAP-1是Fas信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的負(fù)性調(diào)節(jié)因子，也是唯一與FasC端負(fù)性調(diào)節(jié)區(qū)相結(jié)合的因子。有關(guān)FADD、FAP-1和Daxx在腦缺血再灌注損害中的研究報道極少

2、。自由基清除劑依達(dá)拉奉是目前臨床證明有效的神經(jīng)保護(hù)劑，它能夠減少腦缺血損傷后細(xì)胞凋亡，但其影響細(xì)胞凋亡的機(jī)制尚不清楚。本研究通過檢測局灶性腦缺血后FADD、FAP-1和Daxx等基因在大鼠腦內(nèi)的表達(dá)變化，以探討其在腦缺血損傷中的作用，并以依達(dá)拉奉作干預(yù)，觀察其對上述基因和細(xì)胞凋亡的影響，以期為進(jìn)一步研究腦缺血后細(xì)胞凋亡分子病理機(jī)制以及腦梗死的防治提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法:10-12周齡健康雄性Sprague-Dawley大鼠186只

3、，隨機(jī)分為正常組(n=6)、假手術(shù)對照組(n=60)、腦缺血模型組(n=60)和依達(dá)拉奉治療組(n=60)，線栓法制備大腦中動脈梗阻(MCA0)模型，缺血2小時后恢復(fù)再灌注，藥物組在腦缺血再灌注即刻和12小時各腹腔注射依達(dá)拉奉3mg／kg，模型組注射等量的生理鹽水。Longa's的5級標(biāo)準(zhǔn)評分法評價神經(jīng)功能缺損。再灌注后1小時、3小時、6小時、12小時和24小時處死動物。HE染色和Nissl染色觀察病理學(xué)變化，免疫組織化學(xué)、RT-PCR

4、、western blot等方法分別檢測缺血側(cè)項(xiàng)葉大腦皮層FADD、FAP-l、Daxx、Caspase-8蛋白或／和mRNA表達(dá)變化；免疫熒光激光掃描共聚焦顯微鏡觀察FADD和Daxx在神經(jīng)元的定位；末端標(biāo)記法原位檢測神經(jīng)細(xì)胞凋亡。 結(jié)論:(1)大鼠腦缺血急性期FADD、Daxx、Caspase-8蛋白或／和mRNA表達(dá)增加，可能參與腦缺血后促凋亡作用。(2)大鼠腦缺血急性期FAP-1mRNA和蛋白表達(dá)增加，可能參與腦缺血后抗