轉(zhuǎn)WYMV--Nib8基因抗病毒小麥對(duì)土壤生態(tài)系統(tǒng)的影響.pdf

1、小麥?zhǔn)俏覈?guó)乃至世界上最主要的糧食作物之一，其需求量隨著人口增長(zhǎng)與日俱增。但在我國(guó)長(zhǎng)江中下游冬麥區(qū)，小麥黃花葉病是小麥主要病害之一。在前期工作基礎(chǔ)上通過(guò)基因槍法將來(lái)源于小麥黃花葉病毒的復(fù)制酶基因WYMV-Nib8導(dǎo)入受體親本揚(yáng)麥158(Y158)，然后通過(guò)多次回交轉(zhuǎn)育獲得抗小麥黃花葉病的轉(zhuǎn)基因小麥品系N12-1，在多年多點(diǎn)試驗(yàn)中表現(xiàn)出較好的黃花葉病抗性，目前已進(jìn)入生產(chǎn)性試驗(yàn)階段。
　　本試驗(yàn)以N12-1及其受體Y158為材料，研究轉(zhuǎn)

2、基因作物的種植對(duì)根際土壤微生物群落多樣性、主要微生物數(shù)量、土壤酶活的影響，為轉(zhuǎn)基因抗病小麥的環(huán)境安全評(píng)價(jià)建立新的評(píng)價(jià)體系并提供基本的環(huán)評(píng)數(shù)據(jù)，推動(dòng)轉(zhuǎn)基因抗病小麥進(jìn)一步向前發(fā)展。
　　試驗(yàn)材料于2014年10月31號(hào)種植于江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院六合轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)基地，
　　在不同生育期（播種期、返青期、灌漿期和成熟期）采集N12-1和Y158根際土壤并開(kāi)展相關(guān)研究，本試驗(yàn)研究結(jié)果如下:
　　1通過(guò)建立叢枝菌根、鐮刀菌、熒光假單胞菌

3、及禾谷多黏菌實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time qPCR)檢測(cè)體系，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法，對(duì)轉(zhuǎn)基因小麥N12-1和受體小麥Y158各生育期內(nèi)根際土壤中的不同微生物，如叢枝菌根、鐮刀菌、熒光假單胞菌和禾谷多黏菌的拷貝數(shù)進(jìn)行定量分析檢測(cè)。結(jié)果表明，排除土壤中水分的影響，在同一生育期內(nèi)，轉(zhuǎn)基因小麥N12-1和受體小麥根際土壤中叢枝菌根、鐮刀菌、熒光假單胞菌和禾谷多黏菌的拷貝數(shù)均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，無(wú)顯著差異。
　　2運(yùn)用

4、PCR-DGGE技術(shù)，對(duì)轉(zhuǎn)基因小麥N12-1和受體小麥Y158各生育期根際土壤中微生物群落的多樣性進(jìn)行研究分析。結(jié)果表明，在同一生育期內(nèi)，轉(zhuǎn)基因小麥N12-1和受體小麥根際土壤中細(xì)菌、真菌的DGGE圖譜的差異性條帶較少，優(yōu)勢(shì)條帶相似度高，細(xì)菌多樣性明顯高于真菌，細(xì)菌、真菌的群落多樣性指數(shù)、均勻度指數(shù)和主成分分析均無(wú)顯著性差異。
　　3分別采集轉(zhuǎn)基因小麥N12-1和受體小麥Y158各生育期的根際土壤，排除土壤中水分的影響，利用苯酚-

5、次氯酸鈉比色法、DNS法及TTC法測(cè)定其根際土壤中脲酶、蔗糖酶以及脫氫酶的活性。結(jié)果表明，在同一生育期內(nèi)，轉(zhuǎn)WYMV-Nib8基因小麥N12-1和受體小麥根際土壤中蔗糖酶、脲酶以及脫氫酶的活性無(wú)明顯差異。
　　綜上所述，轉(zhuǎn)WYMV-Nib8基因小麥N12-1對(duì)其根際土壤中不同微生物(叢枝菌根、鐮刀菌、熒光假單胞菌和禾谷多黏菌）的拷貝數(shù)，真菌、細(xì)菌的群落多樣性及土壤主要酶活性（蔗糖酶、脲酶以及脫氫酶）均無(wú)顯著影響。因此，可初步認(rèn)為轉(zhuǎn)