煙草種子和土壤攜帶三種病毒對煙苗的侵染分析.pdf

1、煙草，為茄科（Solanaceae）煙屬（Nicotiana）一年生或有限多年生草本植物，是我國重要的經(jīng)濟(jì)作物之一，而煙草業(yè)在我國經(jīng)濟(jì)中也占據(jù)著重要的地位，每年為國家和地方的財(cái)政收入均作出了巨大貢獻(xiàn)。目前，由煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）、黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）以及馬鈴薯Y病毒（Potato virus Y，PVY）引起的煙草花葉病毒病是各大煙區(qū)的主要病害之一

2、，已成為提高煙葉產(chǎn)量和質(zhì)量的主要限制因子，也嚴(yán)重影響了煙草業(yè)的發(fā)展。為了明確以上三種病毒在煙草種子和土壤帶毒情況下對煙苗的侵染情況，為煙草生產(chǎn)實(shí)踐提供參考，本研究主要進(jìn)行了以下幾方面研究。
　　1、利用實(shí)時熒光定量PCR，對煙草感病葉片中的三種病毒的拷貝數(shù)進(jìn)行了定量。本研究根據(jù)三種病毒克隆后的陽性質(zhì)粒測序得到的序列在 NCBI里比對后相似度達(dá)95％以上的序列分別設(shè)計(jì)實(shí)時熒光定量PCR特異引物，將克隆后的陽性質(zhì)粒DNA以10倍梯度稀

3、釋6次作為模板建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定了三種病毒實(shí)時熒光定量PCR檢測方法及反應(yīng)條件的合理性、可靠性；其中，本試驗(yàn)定量得到的三種病毒的拷貝數(shù)分別為TMV：3.72×1010copies/μL，CMV：3.68×1010 copies/μL，PVY：3.76×1010 copies/μL。
　　2、利用已知病毒拷貝數(shù)的病毒汁液磷酸緩沖液浸泡處理種子，不同時間段育苗分析了煙苗感染病毒的陽性率。結(jié)果表明，種子攜帶三種病毒后，TMV對煙苗的侵染

4、能力最強(qiáng)，其次為CMV，再次為PVY；病毒在種子上保持侵染活性的時間PVY要強(qiáng)于 TMV和 CMV。本研究中分別用病毒含量為3.72×108 copies/μL、3.68×108 copies/μL、3.76×108 copies/μL的病毒汁液處理后，室溫放置3個月，煙苗中無TMV和CMV檢測到，放置5個月后，十字期煙苗中TMV、CMV、PVY三種病毒均未檢測到。
　　3、明確了三種病毒均可以通過根部感染煙苗。本研究通過病毒汁液

5、磷酸緩沖液浸根實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，5個不同病毒含量的病毒汁液浸根處理之后，均可使十字期煙苗感染三種病毒。其中分別用病毒含量為3.72×108 copies/μL、3.68×108 copies/μL、3.76×108 copies/μL的病毒汁液浸根處理后，ELISA檢測三種病毒的陽性率分別在40%、26.67%、17.78%以上，而 RT-PCR檢測三種病毒的陽性率分別在90%、30%、20%以上，這也表明了RT-PCR檢測要比ELISA檢測更

6、靈敏。
　　4、明確了除TMV和CMV可以通過土壤傳播外，PVY也可以通過土壤傳播，但三種病毒在土壤中的存活期限存在差異，其中TMV存活時間最長，其次為CMV，PVY的存活時間最短，初步得出用病毒含量為3.72×108 copies/μL病毒汁液處理后，TMV在土壤中至少可以存活5個月，而CMV和PVY在土壤中的存活時間相對較短。不論是育苗基質(zhì)帶毒處理后不同時間段育苗還是不同時間段采集的大田土樣育苗，十字期煙苗感染病毒的檢測結(jié)果均