落葉松高效離體再生體系建立及內(nèi)源激素變化研究.pdf

1、落葉松是我國(guó)北方主要造林樹種，其育種時(shí)間長(zhǎng)、見效慢及后代性狀不能夠定向改良等局限性，因此有必要建立快速繁殖體系以達(dá)到縮短育種周期、定向改良性狀的目的。本研究以成熟合子胚為材料，對(duì)雜種落葉松和長(zhǎng)白落葉松進(jìn)行了離體再生及其內(nèi)源激素含量變化研究，建立了落葉松離體再生體系，為進(jìn)一步開展落葉松遺傳轉(zhuǎn)化研究奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.雜種落葉松高效離體再生體系的建立
　　以雜種落葉松(興10×日13)成熟合子胚為外植體，研究了

2、影響雜種落葉松成熟胚離體再生的多種因素，建立了雜種落葉松高效離體再生體系。結(jié)果表明:在光照條件下，BM+2.0 mg·L-1 TDZ最有利于雜種落葉松愈傷組織的誘導(dǎo)，誘導(dǎo)率高達(dá)90％以上;BM培養(yǎng)基有利于雜種落葉松不定芽的誘導(dǎo)，誘導(dǎo)率達(dá)60.7％，且在BM+1.5 mg·L-1 TDZ條件下誘導(dǎo)率最高為67.73％; BM培養(yǎng)基能促進(jìn)不定芽增殖，增值系數(shù)達(dá)4.48，且在BM+1.0 mg·L-1TDZ條件下增值系數(shù)最高為5.23;不定芽

3、在1/2BM+0.5 mg·L-1 TDZ伸長(zhǎng)比率最高且為205.72％，同時(shí)，在1/2BM培養(yǎng)基中添加2 g·L-1的活性炭也能促進(jìn)伸長(zhǎng);當(dāng)不定芽在1/2BM+0.05 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1 NAA的條件下培養(yǎng)時(shí)，抽莖率最高，為73.96％;不定芽在1/2BM+0.5 mg·L-1 IBA+1.0 mg·L-1 NAA條件下誘導(dǎo)生根的生根率最高，為29.85％，再生植株的移栽成活率為62.5％。
　　2.長(zhǎng)

4、白落葉松高效離體再生體系的建立
　　以長(zhǎng)白落葉松雞西種源成熟合子胚為外植體進(jìn)行長(zhǎng)白落葉松再生體系的建立及優(yōu)化研究。采用不同消毒方法、培養(yǎng)基及激素組合研究外植體的消毒、愈傷組織的誘導(dǎo)、不定芽的誘導(dǎo)及增殖;以不同濃度的赤霉素(GA3)和活性炭(AC)研究?jī)烧邔?duì)不定芽伸長(zhǎng)的影響;采用試管內(nèi)及試管外兩種生根方式研究不定芽的生根。結(jié)果表明，4％NaClO消毒去皮種子15 min，0.5％ NaClO消毒胚2 min為最佳消毒方法;BM+2.

5、0 mg·L-1 TDZ時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率最高，達(dá)88.9％; BM+1.5 mg·L-1 TDZ時(shí)，不定芽誘導(dǎo)率最高，達(dá)80.0％; BM+1.0 mg·L-1 TDZ時(shí)，不定芽增殖最快，增殖系數(shù)為4.98;GA3對(duì)不定芽的伸長(zhǎng)有毒害，2.0 g·L-1活性炭對(duì)不定芽伸長(zhǎng)促進(jìn)作用明顯，且伸長(zhǎng)比率達(dá)261.76％;1/2BM+0.5 mg·L-1 IBA+1.0 mg·L-1 NAA為試管內(nèi)生根的最佳組合，生根率達(dá)26.09％，不定芽在

6、750 mg·L-1 NAA中蘸取25 s試管外生根率最高，達(dá)37.14％。
　　3.落葉松離體培養(yǎng)過(guò)程中內(nèi)源激素含量變化研究
　　應(yīng)用高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用方法(HPLC-MS/MS)研究了雜種落葉松和長(zhǎng)白落葉松植株再生過(guò)程中內(nèi)源激素的含量變化。結(jié)果表明:雜種落葉松與長(zhǎng)白落葉松內(nèi)源ABA、IAA含量均較高，且變化幅度較大，并且IAA含量總體表現(xiàn)出高-低-高的變化規(guī)律;而內(nèi)源ZT及GA3含量相對(duì)較低，但其在不定芽生長(zhǎng)過(guò)程中的