落葉松高效離體再生體系建立及內(nèi)源激素變化研究.pdf

1、落葉松是我國北方主要造林樹種，其育種時間長、見效慢及后代性狀不能夠定向改良等局限性，因此有必要建立快速繁殖體系以達到縮短育種周期、定向改良性狀的目的。本研究以成熟合子胚為材料，對雜種落葉松和長白落葉松進行了離體再生及其內(nèi)源激素含量變化研究，建立了落葉松離體再生體系，為進一步開展落葉松遺傳轉(zhuǎn)化研究奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.雜種落葉松高效離體再生體系的建立
　　以雜種落葉松(興10×日13)成熟合子胚為外植體，研究了

2、影響雜種落葉松成熟胚離體再生的多種因素，建立了雜種落葉松高效離體再生體系。結(jié)果表明:在光照條件下，BM+2.0 mg·L-1 TDZ最有利于雜種落葉松愈傷組織的誘導(dǎo)，誘導(dǎo)率高達90％以上;BM培養(yǎng)基有利于雜種落葉松不定芽的誘導(dǎo)，誘導(dǎo)率達60.7％，且在BM+1.5 mg·L-1 TDZ條件下誘導(dǎo)率最高為67.73％; BM培養(yǎng)基能促進不定芽增殖，增值系數(shù)達4.48，且在BM+1.0 mg·L-1TDZ條件下增值系數(shù)最高為5.23;不定芽

3、在1/2BM+0.5 mg·L-1 TDZ伸長比率最高且為205.72％，同時，在1/2BM培養(yǎng)基中添加2 g·L-1的活性炭也能促進伸長;當(dāng)不定芽在1/2BM+0.05 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1 NAA的條件下培養(yǎng)時，抽莖率最高，為73.96％;不定芽在1/2BM+0.5 mg·L-1 IBA+1.0 mg·L-1 NAA條件下誘導(dǎo)生根的生根率最高，為29.85％，再生植株的移栽成活率為62.5％。
　　2.長

4、白落葉松高效離體再生體系的建立
　　以長白落葉松雞西種源成熟合子胚為外植體進行長白落葉松再生體系的建立及優(yōu)化研究。采用不同消毒方法、培養(yǎng)基及激素組合研究外植體的消毒、愈傷組織的誘導(dǎo)、不定芽的誘導(dǎo)及增殖;以不同濃度的赤霉素(GA3)和活性炭(AC)研究兩者對不定芽伸長的影響;采用試管內(nèi)及試管外兩種生根方式研究不定芽的生根。結(jié)果表明，4％NaClO消毒去皮種子15 min，0.5％ NaClO消毒胚2 min為最佳消毒方法;BM+2.

5、0 mg·L-1 TDZ時，愈傷組織誘導(dǎo)率最高，達88.9％; BM+1.5 mg·L-1 TDZ時，不定芽誘導(dǎo)率最高，達80.0％; BM+1.0 mg·L-1 TDZ時，不定芽增殖最快，增殖系數(shù)為4.98;GA3對不定芽的伸長有毒害，2.0 g·L-1活性炭對不定芽伸長促進作用明顯，且伸長比率達261.76％;1/2BM+0.5 mg·L-1 IBA+1.0 mg·L-1 NAA為試管內(nèi)生根的最佳組合，生根率達26.09％，不定芽在

6、750 mg·L-1 NAA中蘸取25 s試管外生根率最高，達37.14％。
　　3.落葉松離體培養(yǎng)過程中內(nèi)源激素含量變化研究
　　應(yīng)用高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用方法(HPLC-MS/MS)研究了雜種落葉松和長白落葉松植株再生過程中內(nèi)源激素的含量變化。結(jié)果表明:雜種落葉松與長白落葉松內(nèi)源ABA、IAA含量均較高，且變化幅度較大，并且IAA含量總體表現(xiàn)出高-低-高的變化規(guī)律;而內(nèi)源ZT及GA3含量相對較低，但其在不定芽生長過程中的