TGF-β2對(duì)體外培養(yǎng)人眼小梁細(xì)胞CD44s表達(dá)的影響及意義.pdf

1、探討體外培養(yǎng)人眼小梁細(xì)胞(human trabecular cells，HTCs)的方法，觀(guān)察其生物學(xué)特性，并在此基礎(chǔ)上研究人眼小梁細(xì)胞是否表達(dá)黏附分子CD44<,s>以及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β<,2>(transforming growth factor-β<,2>，TGF-β<,2>)對(duì)體外培養(yǎng)人眼小梁細(xì)胞CD44<,s>表達(dá)的影響及其意義。 采用組織塊培養(yǎng)法進(jìn)行體外人眼小梁細(xì)胞的培養(yǎng)，運(yùn)用二甲基噻唑二苯基四唑溴鹽([3-(4，5

2、-dimethylthiazolz-y1)-2，5-dipheny ltetrazolium bramide]，MTT)比色法，倒置顯微鏡、透射電鏡、免疫細(xì)胞化學(xué)法等方法觀(guān)察體外培養(yǎng)的人眼小梁細(xì)胞的生物學(xué)特性并進(jìn)行細(xì)胞鑒定。(2)采用流式細(xì)胞術(shù)定量和RT-PCR半定量檢測(cè)體外培養(yǎng)的人眼小梁細(xì)胞是否表達(dá)黏附分子CD44<,s>及其表達(dá)量。(3)采用流式細(xì)胞術(shù)定量和RT-PCR半定量檢測(cè)體外培養(yǎng)的人眼小梁細(xì)胞經(jīng)濃度為00ng/ml(對(duì)照組)

3、、40ng/ml、80ng/ml、120ng/ml的TGF-β<,2>處理24小時(shí)后，細(xì)胞表達(dá)黏附分子CD44<,s>的量。 (1)組織塊培養(yǎng)10-15天后可見(jiàn)細(xì)胞從其邊緣向外生長(zhǎng)，倒置顯微鏡下呈梭形、圓形、橢圓形，并有多個(gè)突起，電鏡下可見(jiàn)表面有較多的微絨毛，細(xì)胞間縫隙連接，胞質(zhì)內(nèi)見(jiàn)較多次級(jí)溶酶體。(2)免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)纖維黏連蛋白(fibronectin，VN)、層黏連蛋(Laminin，LN)和神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neu

4、ron specific enolase，NSE)染色陽(yáng)性，傳三代細(xì)胞均表現(xiàn)為胞漿呈紅色。(3)流式細(xì)胞術(shù)定量檢測(cè)結(jié)果顯示體外培養(yǎng)的人眼小梁細(xì)胞表達(dá)黏附分子CD44<,s>，其平均熒光強(qiáng)度為79.82±21.94；RT-PCR法CD44<,s>/G3PDH像素值比值為0.59±0.76。(4)運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)經(jīng)濃度為40ng/ml、80ng/ml、120ng/ml的TGF-β<,2>處理的實(shí)驗(yàn)組檢測(cè)，其表達(dá)黏附分子CD44<,s>平均熒

5、光強(qiáng)度為56.53±12.74、74.11±9.94及37.54±8.1低于對(duì)照組的79.82±21.94，結(jié)果經(jīng)Levene方差齊性檢驗(yàn)，由于方差齊性，故采用單因素四水平方差分析各組間差異，LSD法進(jìn)行兩兩組間多重比較，其總F值為 12.239，P=0.000<0.001，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(5)運(yùn)用RT-PCR法對(duì)經(jīng)濃度為40ng/ml、 80ng/ml、120ng/ml的TGF-β<,2>處理的實(shí)驗(yàn)組檢測(cè)，其CD44<,s>/G3

6、PDH像素值比值分別為 0.51±0.76、0.30±0.84以及0.06±0.04與對(duì)照組0.59±0.76比較，其總F值為135.630， P=0.000<0.001，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (1)掌握體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和人眼小梁細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn)、超微結(jié)構(gòu)以及免疫細(xì)胞化學(xué)染色等特點(diǎn)，能夠成功地進(jìn)行人眼小梁細(xì)胞的體外培養(yǎng)及鑒定。(2)體外培養(yǎng)的人眼小梁細(xì)胞高表達(dá)黏附分子CD44<,s>。(3)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β<,2>能抑制人眼小梁細(xì)胞