凋亡相關(guān)蛋白Livin、HSP90α、Clusterin在自身免疫性甲狀腺疾病中的表達(dá).pdf

1、背景與目的：Graves病(Graves disease,GD)和橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto thyroiditis,HT)是臨床上最常見的自身免疫性甲狀腺疾病(autoimmune thyroid diseases,AITD),但其發(fā)病機(jī)理尚未完全闡明。近年來的研究表明,細(xì)胞凋亡受體的激活及調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的因子參與AITD的發(fā)病過程。Livin、熱休克蛋白90α(heat shock protein90α,HSP90α)和聚集素

2、(Clusterin)蛋白是體內(nèi)重要的抗凋亡因子。Livin蛋白主要通過抑制Caspase途徑、激活轉(zhuǎn)化因子β激酶1(TAK1)依賴的c-jun N端激酶1(JNK1)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑發(fā)揮抗凋亡作用。HSP90α既可通過阻止procaspase-9與凋亡蛋白酶活化因子1凋亡體的結(jié)合而抑制凋亡的發(fā)生,又可通過構(gòu)象的特異性與突變型p53結(jié)合,導(dǎo)致突變型p53復(fù)合體積聚,使細(xì)胞半衰期延長(zhǎng)。HSP90α蛋白亦可通過阻止細(xì)胞分裂來發(fā)揮重要的抗凋亡作用

3、。另外HSP90α還具有重要的免疫作用,在抗原的加工與呈遞過程的研究中發(fā)現(xiàn),熱休克蛋白促進(jìn)了這一分子的裝配過程。而且,熱休克蛋白自身可作為不同類病原體的主要抗原以及健康個(gè)體免疫系統(tǒng)的靶蛋白。Clusterin蛋白是一種具有細(xì)胞保護(hù)功能的蛋白質(zhì),具有抗凋亡作用。Clusterin也可與補(bǔ)體C5b-6結(jié)合,阻止其對(duì)補(bǔ)體C7、C8、C9的激活,抑制攻膜復(fù)合體C5b6789的形成,從而阻止補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞溶解。關(guān)于Livin和HSP90α在GD和

4、HT患者甲狀腺組織中的表達(dá),目前國(guó)內(nèi)外均未見報(bào)道。Clusterin蛋白在GD和HT患者甲狀腺組織中的表達(dá),目前國(guó)內(nèi)未見報(bào)道,國(guó)外僅有一篇。為此本研究采用S-P免疫組織化學(xué)方法,對(duì)Livin、HSP90α和Clusterin蛋白在GD和HT中的表達(dá)進(jìn)行研究并分析其之間的相關(guān)性,以探討Livin、HSP90α、Clusterin蛋白在GD和HT發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　材料和方法：1.采用SP免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)26例GD、15例HT

5、患者手術(shù)切除的甲狀腺組織和11例正常甲狀腺組織(取自良性腺瘤旁甲狀腺組織)標(biāo)本中Livin、HSP90α、Clusterin蛋白的表達(dá)。2.結(jié)果判定:由兩個(gè)不了解臨床資料的病理醫(yī)師分別觀測(cè)切片判定染色結(jié)果,取其平均值。以GD、HT及正常甲狀腺組織細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞核被染成棕黃色顆粒狀物作為L(zhǎng)ivin、HSP90α和Clusterin蛋白陽性染色。在隨機(jī)選取的10個(gè)高倍視野(×400)下半定量劃分染色等級(jí):(-):顯色強(qiáng)度與背景無

6、明顯差別;(+):陽性細(xì)胞數(shù)<10％,顯色強(qiáng)度為淡黃色或僅個(gè)別細(xì)胞呈黃至棕黃色染色;(++):陽性細(xì)胞數(shù)及顯色強(qiáng)度介于弱陽性與強(qiáng)陽性之間;(+++):陽性細(xì)胞數(shù)>60％,多數(shù)細(xì)胞呈黃至棕黃色染色。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)。兩樣本或多樣本陽性表達(dá)率的比較應(yīng)用χ~2檢驗(yàn),小樣本資料應(yīng)用Fisher精確概率法。相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析,以α=0.05作為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果：1

7、.Livin、HSP90α蛋白定位于甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞的胞質(zhì)和胞核,Clusterin蛋白主要定位于甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞的胞質(zhì)和胞膜,呈異質(zhì)性表達(dá),陽性著色為棕黃色顆粒。Livin、HSP90α、Clusterin蛋白在間質(zhì)纖維母細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞等均未見表達(dá)。Livin蛋白在正常甲狀腺組織和GD主要表達(dá)在胞核。Livin蛋白在HT主要表達(dá)在胞質(zhì),在淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)區(qū)附近的濾泡上皮細(xì)胞表達(dá)較強(qiáng),Livin蛋白在結(jié)構(gòu)完整、上皮細(xì)

8、胞數(shù)目多、胞漿豐富的甲狀腺濾泡表達(dá)較強(qiáng),而在結(jié)構(gòu)破壞、上皮細(xì)胞胞漿少、萎縮的甲狀腺濾泡表達(dá)相對(duì)較弱。HSP90α蛋白在正常甲狀腺組織、GD和HT中均以胞質(zhì)表達(dá)為主。HSP90α蛋白在GD和HT中淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)區(qū)的表達(dá)與遠(yuǎn)離淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)區(qū)的表達(dá)均無明顯差別。Clusterin蛋白在正常甲狀腺組織無表達(dá);在GD主要表達(dá)在甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞胞質(zhì)和胞膜;在HT中,Clusterin蛋白主要表達(dá)在濾泡上皮細(xì)胞的胞質(zhì)和胞膜,濾泡腔側(cè)細(xì)胞膜較基底膜側(cè)細(xì)

9、胞膜著色強(qiáng),另外在間質(zhì)中浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞形成的淋巴濾泡的生發(fā)中心,可見一些有枝蔓狀突起的細(xì)胞陽性表達(dá)Clusterin蛋白,根據(jù)其形態(tài),推測(cè)為濾泡樹突狀細(xì)胞。2.Livin、HSP90α、Clusterin蛋白在GD和HT中的表達(dá)均明顯高于正常甲狀腺組織(P均<0.05),Livin、HSP90α蛋白在GD和HT中的表達(dá)均無明顯差別(P均>0.05)。Clusterin蛋白在HT中的表達(dá)明顯高于GD(P<0.05)。3.在HT中,Livi

10、n蛋白的表達(dá)與HSP90α蛋白的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.899,P<0.05),與Clusterin蛋白的表達(dá)無明顯相關(guān)性(r=0.202,P>0.05),HSP90α蛋白的表達(dá)與Clusterin蛋白的表達(dá)亦無顯著相關(guān)性(r=0.374,P>0.05)。在GD中,Livin蛋白的表達(dá)與HSP90α、Clusterin蛋白的表達(dá)均無顯著相關(guān)性(r分別為0.211和0.126,P均>0.05),HSP90α與Clusterin蛋白的表達(dá)

11、呈顯著正相關(guān)(r=0.617,P<0.05)。
　　結(jié)論：1.本研究證實(shí)在GD和HT中,Livin、HSP90α和Clusterin蛋白的表達(dá)均明顯高于正常甲狀腺組織,這三種蛋白主要由甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞分泌產(chǎn)生。2.Livin、HSP90α和Clusterin蛋白在GD中異常高表達(dá)可能主要通過抑制部分甲狀腺細(xì)胞凋亡,間接促進(jìn)甲狀腺組織的增生;Livin、HSP90α和Clusterin蛋白在HT中甲狀腺濾泡上皮的高表達(dá)可能是機(jī)體在