凋亡相關蛋白Livin、HSP90α、Clusterin在自身免疫性甲狀腺疾病中的表達.pdf

1、背景與目的：Graves病(Graves disease,GD)和橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto thyroiditis,HT)是臨床上最常見的自身免疫性甲狀腺疾病(autoimmune thyroid diseases,AITD),但其發(fā)病機理尚未完全闡明。近年來的研究表明,細胞凋亡受體的激活及調(diào)節(jié)細胞凋亡的因子參與AITD的發(fā)病過程。Livin、熱休克蛋白90α(heat shock protein90α,HSP90α)和聚集素

2、(Clusterin)蛋白是體內(nèi)重要的抗凋亡因子。Livin蛋白主要通過抑制Caspase途徑、激活轉(zhuǎn)化因子β激酶1(TAK1)依賴的c-jun N端激酶1(JNK1)信號轉(zhuǎn)導途徑發(fā)揮抗凋亡作用。HSP90α既可通過阻止procaspase-9與凋亡蛋白酶活化因子1凋亡體的結(jié)合而抑制凋亡的發(fā)生,又可通過構(gòu)象的特異性與突變型p53結(jié)合,導致突變型p53復合體積聚,使細胞半衰期延長。HSP90α蛋白亦可通過阻止細胞分裂來發(fā)揮重要的抗凋亡作用

3、。另外HSP90α還具有重要的免疫作用,在抗原的加工與呈遞過程的研究中發(fā)現(xiàn),熱休克蛋白促進了這一分子的裝配過程。而且,熱休克蛋白自身可作為不同類病原體的主要抗原以及健康個體免疫系統(tǒng)的靶蛋白。Clusterin蛋白是一種具有細胞保護功能的蛋白質(zhì),具有抗凋亡作用。Clusterin也可與補體C5b-6結(jié)合,阻止其對補體C7、C8、C9的激活,抑制攻膜復合體C5b6789的形成,從而阻止補體介導的細胞溶解。關于Livin和HSP90α在GD和

4、HT患者甲狀腺組織中的表達,目前國內(nèi)外均未見報道。Clusterin蛋白在GD和HT患者甲狀腺組織中的表達,目前國內(nèi)未見報道,國外僅有一篇。為此本研究采用S-P免疫組織化學方法,對Livin、HSP90α和Clusterin蛋白在GD和HT中的表達進行研究并分析其之間的相關性,以探討Livin、HSP90α、Clusterin蛋白在GD和HT發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　材料和方法：1.采用SP免疫組織化學技術檢測26例GD、15例HT

5、患者手術切除的甲狀腺組織和11例正常甲狀腺組織(取自良性腺瘤旁甲狀腺組織)標本中Livin、HSP90α、Clusterin蛋白的表達。2.結(jié)果判定:由兩個不了解臨床資料的病理醫(yī)師分別觀測切片判定染色結(jié)果,取其平均值。以GD、HT及正常甲狀腺組織細胞質(zhì)、細胞膜和(或)細胞核被染成棕黃色顆粒狀物作為Livin、HSP90α和Clusterin蛋白陽性染色。在隨機選取的10個高倍視野(×400)下半定量劃分染色等級:(-):顯色強度與背景無

6、明顯差別;(+):陽性細胞數(shù)<10％,顯色強度為淡黃色或僅個別細胞呈黃至棕黃色染色;(++):陽性細胞數(shù)及顯色強度介于弱陽性與強陽性之間;(+++):陽性細胞數(shù)>60％,多數(shù)細胞呈黃至棕黃色染色。3.統(tǒng)計學處理所有數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS12.0軟件進行統(tǒng)計學檢驗。兩樣本或多樣本陽性表達率的比較應用χ~2檢驗,小樣本資料應用Fisher精確概率法。相關性檢驗采用Spearman等級相關分析,以α=0.05作為顯著性檢驗水準。
　　結(jié)果：1

7、.Livin、HSP90α蛋白定位于甲狀腺濾泡上皮細胞的胞質(zhì)和胞核,Clusterin蛋白主要定位于甲狀腺濾泡上皮細胞的胞質(zhì)和胞膜,呈異質(zhì)性表達,陽性著色為棕黃色顆粒。Livin、HSP90α、Clusterin蛋白在間質(zhì)纖維母細胞、血管內(nèi)皮細胞和浸潤的淋巴細胞等均未見表達。Livin蛋白在正常甲狀腺組織和GD主要表達在胞核。Livin蛋白在HT主要表達在胞質(zhì),在淋巴細胞浸潤區(qū)附近的濾泡上皮細胞表達較強,Livin蛋白在結(jié)構(gòu)完整、上皮細

8、胞數(shù)目多、胞漿豐富的甲狀腺濾泡表達較強,而在結(jié)構(gòu)破壞、上皮細胞胞漿少、萎縮的甲狀腺濾泡表達相對較弱。HSP90α蛋白在正常甲狀腺組織、GD和HT中均以胞質(zhì)表達為主。HSP90α蛋白在GD和HT中淋巴細胞浸潤區(qū)的表達與遠離淋巴細胞浸潤區(qū)的表達均無明顯差別。Clusterin蛋白在正常甲狀腺組織無表達;在GD主要表達在甲狀腺濾泡上皮細胞胞質(zhì)和胞膜;在HT中,Clusterin蛋白主要表達在濾泡上皮細胞的胞質(zhì)和胞膜,濾泡腔側(cè)細胞膜較基底膜側(cè)細

9、胞膜著色強,另外在間質(zhì)中浸潤的淋巴細胞形成的淋巴濾泡的生發(fā)中心,可見一些有枝蔓狀突起的細胞陽性表達Clusterin蛋白,根據(jù)其形態(tài),推測為濾泡樹突狀細胞。2.Livin、HSP90α、Clusterin蛋白在GD和HT中的表達均明顯高于正常甲狀腺組織(P均<0.05),Livin、HSP90α蛋白在GD和HT中的表達均無明顯差別(P均>0.05)。Clusterin蛋白在HT中的表達明顯高于GD(P<0.05)。3.在HT中,Livi

10、n蛋白的表達與HSP90α蛋白的表達呈顯著正相關(r=0.899,P<0.05),與Clusterin蛋白的表達無明顯相關性(r=0.202,P>0.05),HSP90α蛋白的表達與Clusterin蛋白的表達亦無顯著相關性(r=0.374,P>0.05)。在GD中,Livin蛋白的表達與HSP90α、Clusterin蛋白的表達均無顯著相關性(r分別為0.211和0.126,P均>0.05),HSP90α與Clusterin蛋白的表達

11、呈顯著正相關(r=0.617,P<0.05)。
　　結(jié)論：1.本研究證實在GD和HT中,Livin、HSP90α和Clusterin蛋白的表達均明顯高于正常甲狀腺組織,這三種蛋白主要由甲狀腺濾泡上皮細胞分泌產(chǎn)生。2.Livin、HSP90α和Clusterin蛋白在GD中異常高表達可能主要通過抑制部分甲狀腺細胞凋亡,間接促進甲狀腺組織的增生;Livin、HSP90α和Clusterin蛋白在HT中甲狀腺濾泡上皮的高表達可能是機體在