體外循環(huán)下行室間隔缺損修補術(shù)患兒單個核細(xì)胞免疫活性的變化.pdf

1、目的：體外循環(huán)(ECC)期間許多因素可導(dǎo)致免疫功能的下降，特別是細(xì)胞免疫功能的下降。這些因素主要包括神經(jīng).內(nèi)分泌系統(tǒng)對免疫系統(tǒng)的調(diào)控失調(diào)、ECC時血液直接接觸非生理性物質(zhì)表面、手術(shù)創(chuàng)傷、器官缺血再灌注損傷、內(nèi)毒素釋放、輸血、低溫、麻醉、氧自由基、應(yīng)激、藥物等。單個核細(xì)胞在ECC引發(fā)的細(xì)胞免疫反應(yīng)過程中發(fā)揮著重要的作用。目前關(guān)于小兒ECC對單個核細(xì)胞的數(shù)量、亞群和功能的影響尚未形成系統(tǒng)研究。 本研究希望通過檢測小兒圍ECC期單個核

2、細(xì)胞主要為T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞及自然殺傷(NK)細(xì)胞的動態(tài)變化，系統(tǒng)探討小兒ECC前后單個核細(xì)胞的變化與發(fā)展規(guī)律，為臨床防治ECC后細(xì)胞免疫功能抑制提供檢驗依據(jù)。 方法： 1.病例選擇：選擇擇期于ECC下行室間隔缺損修補術(shù)的患兒32例，年齡8月～3歲(平均1.6±0.3歲)；體重7.1～13kg(平均11.3±1.2kg)。 2.麻醉方法：患者入室前給予氯胺酮6mg/kg肌注，麻醉誘導(dǎo)應(yīng)用芬太尼10μ

3、g/kg，咪唑安定0.1mg/kg，維庫溴銨0.1 mg/kg，氣管插管后復(fù)合異氟烷吸入維持麻醉。術(shù)中間斷追加咪唑安定、芬太尼、維庫嗅銨以及吸入異氟烷維持麻醉。主動脈插管前靜脈給予肝素3mg/kg。 3.體外循環(huán)方法：使用膜式氧合器,Sarns-8000型滾壓泵。采用全身淺低溫和中度血液稀釋，管道預(yù)充應(yīng)用晶體液和膠體液(晶膠比為1:1～1.5)，甘露醇(0.5g/kg)及濃縮紅細(xì)胞(150～300ml)。灌注流量按照2.2～3.

4、0L/min/m2計算。灌注壓力維持在35～65 mmHg左右。ECC結(jié)束后以魚精蛋白1.2～1.5:1中和體內(nèi)肝素。 4.標(biāo)本采集：分別于麻醉誘導(dǎo)后(T0)，停ECC即刻(T1)，術(shù)后第1天(T2)，術(shù)后第3天(T3)及術(shù)后第7天(T4)共5個時間點采取靜脈血標(biāo)本。應(yīng)用流式細(xì)胞儀(BD Biosciences)和免疫組織化學(xué)染色兩種方法進(jìn)行定量、定位測定CD3+、cD4+、CD8+、CD19+、CD14+、CD16+56+細(xì)胞

5、百分率，采用組織化學(xué)方法進(jìn)行核仁組成區(qū)嗜銀蛋白(AgNORs)染色并在全自動數(shù)碼顯微鏡下測定其直徑，計算出每個細(xì)胞核中AgNORs的個數(shù)。 5.數(shù)據(jù)處理：采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示。不同時點的組內(nèi)比較采用重復(fù)測量數(shù)據(jù)的方差分析(ANOVA)；應(yīng)用Pearson分析法進(jìn)行相關(guān)性分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.01為有顯著差異。 結(jié)果： 1.E

6、CC時間41～62min，平均為53.5±12.60min;主動脈阻斷時間21～39min，平均為30.3±10.7min，所有病例均痊愈出院。 2.CD3+細(xì)胞百分?jǐn)?shù)變化情況：與麻醉誘導(dǎo)后(值為57.87±3.28)比較，停ECC即刻及術(shù)后1天、3天均顯著降低，術(shù)后1天降到最低值43.98±4.53，術(shù)后3天回升，術(shù)后7天恢復(fù)至麻醉誘導(dǎo)后水平。 3.CD4+細(xì)胞百分?jǐn)?shù)變化情況：與麻醉誘導(dǎo)后(值為35.96±2.12)比

7、較，停ECC即刻降低，術(shù)后1、3天均顯著降低，術(shù)后1天降到最低值26.89±3.42，術(shù)后3天回升，術(shù)后7天恢復(fù)至麻醉誘導(dǎo)后水平。 4.CD8+細(xì)胞百分?jǐn)?shù)變化情況：與麻醉誘導(dǎo)后(值為20.91±1.20)比較，停ECC即刻及術(shù)后1、3、7天均無顯著變化。 5.CD4+/CD8+比值變化情況：與麻醉誘導(dǎo)后(值為1.72±0.03)比較，術(shù)后1天顯著降低至1.34±0.29，術(shù)后3到7天恢復(fù)到麻醉誘導(dǎo)后水平。 6.C

8、D19+細(xì)胞百分?jǐn)?shù)變化情況：與麻醉誘導(dǎo)后(值為15.99±1.17)比較，停ECC即刻下降至14.08±1.89，術(shù)后1到7天恢復(fù)到麻醉誘導(dǎo)后水平。 7.CD14+細(xì)胞百分?jǐn)?shù)變化情況：與麻醉誘導(dǎo)后(值為9.47±0.43)比較，停ECC即刻顯著下降至8.36±1.26，術(shù)后1到3天恢復(fù)到麻醉誘導(dǎo)后水平，術(shù)后7天增高至10.19±0.99)。 8.CD16+56+細(xì)胞百分?jǐn)?shù)變化情況：與麻醉誘導(dǎo)后(值為11.90±0.79)

9、比較，停ECC即刻、術(shù)后1天均顯著升高，術(shù)后1天升到13.17±2.48，術(shù)后3到7天恢復(fù)到麻醉誘導(dǎo)后水平()。 9.免疫細(xì)胞化學(xué)染色證實CD3、CD4、CD8抗原表達(dá)均在相應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞膜上，CD3+百分率與流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果呈弱正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r=0.492)，CD4+、CD8+細(xì)胞百分率與流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果呈強正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r分別為0.911，0.991)。 10.AgNORs變化情況：形態(tài)類型為單一型，大都呈規(guī)則

10、的圓形，ECC前后形態(tài)無變化:AgNORs的數(shù)量分別為：麻醉誘導(dǎo)后1.62±0.57個/細(xì)胞核，停ECC即刻1.58±0.46個/細(xì)胞核，術(shù)后1天1.50±0.51個/細(xì)胞核，術(shù)后3天1.55±0.54個/細(xì)胞核，術(shù)后7天1.67±0.65個/細(xì)胞核，ECC前后的數(shù)量AgNORs變化不明顯。 結(jié)論： 1.小兒ECC后T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞的數(shù)量減少是細(xì)胞免疫功能受抑制的主要因素。其中T淋巴細(xì)胞的變化可能是最重要

11、的，其亞型CD4+/CD8+比值有可能作為評價細(xì)胞免疫功能受抑制的重要指標(biāo)之一。 2.小兒ECC后雖然B淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞恢復(fù)較快，但T淋巴細(xì)胞恢復(fù)較慢，可能是病毒、細(xì)菌和/或寄生蟲感染的高危因素。 3.流式細(xì)胞儀和免疫組織化學(xué)染色均可對T淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞百分率進(jìn)行較好檢測，二種方法的結(jié)果呈正相關(guān)。 4.ECC均未對小兒各種單個核免疫細(xì)胞(T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞及NK細(xì)胞)的增殖