人RNase-Ⅲ Dicer在原發(fā)性肝細胞癌中表達量的研究.pdf

1、本文研究了與RNA干擾(RNA interference，RNAi)相關(guān)的酶-人RNase-HI Dicer在原發(fā)性肝細胞癌(primary hepatocellular carcinoma，PHC)中表達量的改變，并初步探討Dicer表達量的改變與乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)的持續(xù)復(fù)制及與PHC惡性增殖趨勢的關(guān)系。全文分為三個部分： 第一部分實時熒光定量RT-PCR方法的建立及Dicer mRNA

2、在PHC中的表達研究。 目的：了解PHC中Dicer mRNA表達量的變化。 方法：首先建立一個特異性強、靈敏度高、重復(fù)性好、定量準確、速度快、全封閉的實時熒光定量RT-PCR方法，對人正常肝細胞系WRL-68，肝癌細胞系HepG2、HepG2.2.15及20例PHC組織和癌旁配對肝組織進行Dicer mRNA表達量的檢測。 結(jié)果：與人正常肝細胞系WRL-68相比，肝癌細胞系HepG2、HepG2.2.15中Di

3、cer mRNA的表達量顯著下降；與癌旁配對肝組織相比，PHC組織中Dicer mRNA的表達量也顯著下降。 結(jié)論：在PHC中，細胞水平和組織水平Dicer mRNA的表達量均明顯下降。 第二部分Dicer蛋白在PHC中的定位及表達研究。 目的：了解PHC中Dicer蛋白在細胞中的定位及其表達量的改變。 方法：用免疫細胞化學(xué)(immunocytochemistry，ICC)和免疫組織化學(xué)(immunohi

4、stochemistry，IHC)定位方法檢測Dicer蛋白在人正常肝細胞系WRL-68，肝癌細胞系HepG2、HepG2.2.15及20例PHC組織和癌旁配對肝組織中的定位。用半定量免疫印跡(western blotting，WB)方法檢測Dicer蛋白在人正常肝細胞系WRL-68、人胎肝細胞系L-02，肝癌細胞系HepG2、HepG2.2.15、Hep3B、SMMC-7721、Huh-7及20例PHC組織和癌旁配對肝組織中的表達。

5、 結(jié)果：Dicer蛋白在PHC中主要定位于胞漿內(nèi)。與人正常肝細胞系WRL-68相比和與人胎肝細胞系L-02相比，肝癌細胞系HepG2、HepG2.2.15、Hep3B、SMMC-7721、Huh-7中Dicer蛋白的表達量都上升；與癌旁配對肝組織相比，PHC組織中Dicer蛋白的表達量也顯著上升。 結(jié)論：在PHC中Dicer蛋白是定位于胞漿內(nèi)的一種酶；細胞水平和組織水平Dicer蛋白的表達量均明顯上升，而Dicer mRN

6、A表達水平卻顯著下降，提示Dicer從轉(zhuǎn)錄水平到翻譯水平存在著某種調(diào)節(jié)放大機制。 第三部分RNAi對Dicer蛋白表達的影響及Dicer表達異常與HBV持續(xù)復(fù)制及與PHC惡性增殖趨勢關(guān)系的研究。 目的：了解Dicer蛋白表達量的改變是否與HBV的持續(xù)復(fù)制及是否與PHC的惡性增殖趨勢有關(guān)。 方法：選用HBV陽性肝癌細胞系HepG2.2.15作為實驗用細胞，采用RNAi技術(shù)干擾Dicer蛋白的表達，觀察與HBV持續(xù)復(fù)

7、制及與該細胞惡性增殖趨勢有關(guān)指標的變化。 結(jié)果：Dicer在干擾48h后明顯下降，此時與HBV持續(xù)復(fù)制有關(guān)的指標無顯著性差異；但該細胞達到一定的細胞抑制率，且與該細胞惡性增殖趨勢有關(guān)的指標除白蛋白(albnmin，ALB)外，甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase，ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferas