NDRG1在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的亞細(xì)胞表達(dá)及其功能的初步研究.pdf

1、背景及目的:
　　在世界范圍內(nèi)，肝癌是男性腫瘤發(fā)病率排名第五位、女性腫瘤發(fā)病率排名第七位的惡性腫瘤，而其致死率分別排在男女性腫瘤致死率的第二位和第六位，其中肝細(xì)胞癌是最常見(jiàn)的組織學(xué)類型，占肝癌總數(shù)的70％～85％。肝癌早期癥狀隱匿，診斷率低，預(yù)后較差，術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移常見(jiàn)，所以臨床上迫切需要合適的預(yù)測(cè)肝癌進(jìn)展的生物標(biāo)志物。據(jù)報(bào)道，NDRG1是一個(gè)和腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的具有多效性功能的蛋白，有趣的是，在肝癌的研究中，NDRG1竟被賦予兩

2、種不同的角色，我們的研究探討了NDRG1蛋白在肝癌中的表達(dá)情況及其亞細(xì)胞定位特點(diǎn)并通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)初步驗(yàn)證NDRG1表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響，最后我們利用PCRarray實(shí)驗(yàn)初步確定了與NDRG1功能發(fā)揮相關(guān)的基因。
　　方法:
　　1、通過(guò)肝癌組織芯片免疫組織化學(xué)技術(shù)，研究NDRG1在肝癌及癌旁細(xì)胞中的表達(dá)情況及定位，并著重分析NDRG1亞細(xì)胞定位與肝癌臨床病理學(xué)特點(diǎn)的關(guān)系，探討NDRG1在肝癌發(fā)生進(jìn)展巾的表達(dá)特點(diǎn)。

3、r>　　2、構(gòu)建NDRG1-shRNA，敲除肝癌細(xì)胞株BEL7402細(xì)胞中NDRG1基因的表達(dá)，采用qPCR和westernblot技術(shù)檢測(cè)干擾效果。
　　3、應(yīng)用transwell小室和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NDRG1基因敲除后BEL7402細(xì)胞侵襲和運(yùn)動(dòng)能力的變化。
　　4、應(yīng)用cellcountingkit-8(CCK8)試劑盒測(cè)定干擾前后BEL7402細(xì)胞增殖能力的變化。
　　5、應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)BEL7402細(xì)胞凋

4、亡水平的變化。
　　6、應(yīng)用PCRarray實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證NDRG1基因敲除后BEL7402細(xì)胞中與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　1、NDRG1蛋白在正常肝細(xì)胞中不表達(dá)，在肝癌細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，而且NDRG1蛋白表達(dá)的亞細(xì)胞定位與其臨床病理學(xué)特點(diǎn)密切相關(guān)。NDRG1蛋白主要在肝癌細(xì)胞漿中表達(dá)，且其表達(dá)高低與TNM分期呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)(P＜0.01)，即隨著原發(fā)腫瘤累及范圍及程度增加，NDRG1胞漿表達(dá)降低。ND

5、RG1在肝癌細(xì)胞胞膜上的表達(dá)明顯高于其在癌旁細(xì)胞胞膜上的表達(dá)，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　2、NDRG1基因敲除后，其在BEL7402細(xì)胞中的表達(dá)明顯降低，且NDRG1表達(dá)降低對(duì)BEL7402細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯影響。
　　3、NDRG1基因敲除顯著增強(qiáng)了BEL7402細(xì)胞的侵襲和運(yùn)動(dòng)能力，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　4、NDRG1基因敲除后，BEL7402細(xì)胞增殖能力顯著增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

6、P＜0.01)。
　　5、NDRG1基因敲除后，BEL7402細(xì)胞凋亡水平顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　6、NDRG1基因敲除后BEL7402細(xì)胞中CTSL1、IL-1β、ITGB3、MMP10、SERPINE1等基因的表達(dá)顯著升高，而MMP13、TNFSF10的表達(dá)則顯著降低。
　　結(jié)論:
　　1、本研究分析了NDRG1在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)特點(diǎn)，并首次討論了NDRG1蛋白亞細(xì)胞定位與肝癌臨床病

7、理學(xué)特點(diǎn)的相關(guān)性。NDRG1在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)相比正常肝細(xì)胞中明顯升高，亞細(xì)胞表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)其在肝癌細(xì)胞胞漿中的表達(dá)與原發(fā)腫瘤累及范圍和程度呈負(fù)相關(guān)性，且在肝癌細(xì)胞胞膜上的表達(dá)明顯高于其在正常肝細(xì)胞胞膜上的表達(dá)。
　　2、通過(guò)驗(yàn)證NDRG1基因敲除后對(duì)體外肝癌細(xì)胞株BEL7402細(xì)胞的生物學(xué)功能的影響，我們發(fā)現(xiàn)NDRG1能夠抑制細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡，且能夠抑制細(xì)胞的侵襲和運(yùn)動(dòng)能力。
　　3、PCRarray實(shí)驗(yàn)證實(shí)，NDRG