TPD52基因在原發(fā)性肝細胞癌中的表達及作用的初步研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　原發(fā)性肝癌是全球實體瘤中第五位發(fā)病和第三位死因的癌癥，其中大多數屬于肝細胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）。我國在2015年開展癌癥統計調查結果顯示，肝癌死因順位高居第三位?？梢?，肝癌已成為威脅人類健康的主要腫瘤之一。目前，HCC的一線治療方法是肝切除術和局部射頻消融，但其治療效果常常受到各種因素的限制，例如肝功能衰竭、多病灶、病人自身健康狀況等。因此，HCC的多種替代療法也應運

2、而生，包括選擇性動脈內的放射治療（SIRT）和分子靶向治療（索拉菲尼）等。HCC對傳統的化療和放療不敏感，因此患者術后也常加以輔助免疫治療來縮小殘余瘤灶。然而，HCC很容易發(fā)生復發(fā)，尤其是肝內復發(fā)，因此患者只有不足30％的長期生存率。HCC的形成和進展是一個復雜的多基因改變的過程，如相關癌基因的過表達和某些抑癌基因的失活等。因此，深入研究與HCC密切相關的基因并闡明其對HCC的作用，有助于我們了解HCC的發(fā)生發(fā)展機制，也對提高HCC的診

3、治水平和預后評估具有重要意義。
　　腫瘤蛋白D52（tumor protein D52，TPD52）在20年前被首次發(fā)現。人TPD52長度約為180-200個氨基酸殘基，包含了許多順序結構，如Coil-coil序列，PEST基序等。許多研究表明，TPD52參與調解多種細胞功能，如細胞增殖、生存、DNA修復、胞外分泌以及囊泡運輸，但其在惡性腫瘤中的作用仍存在爭議。TPD52在多種腫瘤中呈現高表達水平，包括乳腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、伯基特

4、淋巴瘤、黑色素瘤和卵巢癌等；而在一些腫瘤，如乳突狀腎細胞瘤、腎透明細胞瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤和肺癌中的表達是下調的，但關于TPD52在HCC中的表達及診治意義尚缺乏相關的研究報道。
　　本研究欲通過熒光定量RT-PCR、western blotting和免疫組織化學染色法檢測TPD52在HCC中的表達情況，分析其與HCC腫瘤特征及患者臨床參數及預后的關系，并進一步探究TPD52在HCC發(fā)生發(fā)展中的分子機制，從而為將來肝癌疾病的臨

5、床診斷及治療提供新的理論依據。
　　研究方法：
　　采用熒光定量RT-PCR、western blotting和免疫組化方法檢測TPD52在肝癌組織和肝癌細胞中的表達情況，探討TPD52與HCC腫瘤特征及臨床指標的關系，并分析其在患者預后中的作用。通過細胞轉染方法，構建過表達/沉默TPD52的HepG2和Bel7402細胞株，研究TPD52在p21相關通路上的作用情況。
　　統計方法：秩和檢驗用于比較TPD52在肝癌組

6、織和癌旁組織中的mRNA轉錄水平及蛋白表達水平差異；卡方檢驗用于分析TPD52表達水平與臨床參數或P21表達水平的關系；生存分析用于比較TPD52高表達組和TPD52低表達組之間總生存期和無病進展生存期的差異；單因素和多因素Cox回歸分析用于探究TPD52表達水平和臨床特征對HCC術后生存的影響。
　　結果：
　　1、肝癌組織中TPD52的mRNA轉錄水平（p<0.05）和蛋白表達水平（p=0.039）明顯低于癌旁組織；同樣

7、地，與正常肝細胞LO2相比，TPD52在肝癌細胞株中mRNA轉錄水平和蛋白表達水平亦明顯下調。
　　2、TPD52陽性染色主要位于細胞胞漿和細胞膜中，其在癌旁組織中的表達水平明顯比在癌組織中的表達高；相關分析表明TPD52表達水平與TNM分期顯著相關（p=0.011），高表達TPD52的患者總生存期（p=0.007）和無病進展生存期（p=0.019）明顯長于低表達者；多因素分析表明TPD52表達水平是患者總生存（p=0.019）和

8、無病進展生存（p=0.019）的獨立預測因素。
　　3、肝癌中TPD52和p21的表達呈現正相關關系（r=0.176，p=0.026），且同時高表達水平的TPD52和p21能明顯提高患者總生存期（p=0.012）和無病進展生存期（p=0.013）。
　　4、體外實驗證實，過表達TPD52可上調p53、p21和下調MDM2、BCL2及P-GSK-3β的水平；沉默TPD52則可下調p53、p21和上調MDM2、BCL2及P-GS