TPD52基因在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及作用的初步研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　原發(fā)性肝癌是全球?qū)嶓w瘤中第五位發(fā)病和第三位死因的癌癥，其中大多數(shù)屬于肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）。我國在2015年開展癌癥統(tǒng)計(jì)調(diào)查結(jié)果顯示，肝癌死因順位高居第三位。可見，肝癌已成為威脅人類健康的主要腫瘤之一。目前，HCC的一線治療方法是肝切除術(shù)和局部射頻消融，但其治療效果常常受到各種因素的限制，例如肝功能衰竭、多病灶、病人自身健康狀況等。因此，HCC的多種替代療法也應(yīng)運(yùn)

2、而生，包括選擇性動(dòng)脈內(nèi)的放射治療（SIRT）和分子靶向治療（索拉菲尼）等。HCC對(duì)傳統(tǒng)的化療和放療不敏感，因此患者術(shù)后也常加以輔助免疫治療來縮小殘余瘤灶。然而，HCC很容易發(fā)生復(fù)發(fā)，尤其是肝內(nèi)復(fù)發(fā)，因此患者只有不足30％的長期生存率。HCC的形成和進(jìn)展是一個(gè)復(fù)雜的多基因改變的過程，如相關(guān)癌基因的過表達(dá)和某些抑癌基因的失活等。因此，深入研究與HCC密切相關(guān)的基因并闡明其對(duì)HCC的作用，有助于我們了解HCC的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，也對(duì)提高HCC的診

3、治水平和預(yù)后評(píng)估具有重要意義。
　　腫瘤蛋白D52（tumor protein D52，TPD52）在20年前被首次發(fā)現(xiàn)。人TPD52長度約為180-200個(gè)氨基酸殘基，包含了許多順序結(jié)構(gòu)，如Coil-coil序列，PEST基序等。許多研究表明，TPD52參與調(diào)解多種細(xì)胞功能，如細(xì)胞增殖、生存、DNA修復(fù)、胞外分泌以及囊泡運(yùn)輸，但其在惡性腫瘤中的作用仍存在爭議。TPD52在多種腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)水平，包括乳腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、伯基特

4、淋巴瘤、黑色素瘤和卵巢癌等；而在一些腫瘤，如乳突狀腎細(xì)胞瘤、腎透明細(xì)胞瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤和肺癌中的表達(dá)是下調(diào)的，但關(guān)于TPD52在HCC中的表達(dá)及診治意義尚缺乏相關(guān)的研究報(bào)道。
　　本研究欲通過熒光定量RT-PCR、western blotting和免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)TPD52在HCC中的表達(dá)情況，分析其與HCC腫瘤特征及患者臨床參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系，并進(jìn)一步探究TPD52在HCC發(fā)生發(fā)展中的分子機(jī)制，從而為將來肝癌疾病的臨

5、床診斷及治療提供新的理論依據(jù)。
　　研究方法：
　　采用熒光定量RT-PCR、western blotting和免疫組化方法檢測(cè)TPD52在肝癌組織和肝癌細(xì)胞中的表達(dá)情況，探討TPD52與HCC腫瘤特征及臨床指標(biāo)的關(guān)系，并分析其在患者預(yù)后中的作用。通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，構(gòu)建過表達(dá)/沉默TPD52的HepG2和Bel7402細(xì)胞株，研究TPD52在p21相關(guān)通路上的作用情況。
　　統(tǒng)計(jì)方法：秩和檢驗(yàn)用于比較TPD52在肝癌組

6、織和癌旁組織中的mRNA轉(zhuǎn)錄水平及蛋白表達(dá)水平差異；卡方檢驗(yàn)用于分析TPD52表達(dá)水平與臨床參數(shù)或P21表達(dá)水平的關(guān)系；生存分析用于比較TPD52高表達(dá)組和TPD52低表達(dá)組之間總生存期和無病進(jìn)展生存期的差異；單因素和多因素Cox回歸分析用于探究TPD52表達(dá)水平和臨床特征對(duì)HCC術(shù)后生存的影響。
　　結(jié)果：
　　1、肝癌組織中TPD52的mRNA轉(zhuǎn)錄水平（p<0.05）和蛋白表達(dá)水平（p=0.039）明顯低于癌旁組織；同樣

7、地，與正常肝細(xì)胞LO2相比，TPD52在肝癌細(xì)胞株中mRNA轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水平亦明顯下調(diào)。
　　2、TPD52陽性染色主要位于細(xì)胞胞漿和細(xì)胞膜中，其在癌旁組織中的表達(dá)水平明顯比在癌組織中的表達(dá)高；相關(guān)分析表明TPD52表達(dá)水平與TNM分期顯著相關(guān)（p=0.011），高表達(dá)TPD52的患者總生存期（p=0.007）和無病進(jìn)展生存期（p=0.019）明顯長于低表達(dá)者；多因素分析表明TPD52表達(dá)水平是患者總生存（p=0.019）和

8、無病進(jìn)展生存（p=0.019）的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素。
　　3、肝癌中TPD52和p21的表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系（r=0.176，p=0.026），且同時(shí)高表達(dá)水平的TPD52和p21能明顯提高患者總生存期（p=0.012）和無病進(jìn)展生存期（p=0.013）。
　　4、體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，過表達(dá)TPD52可上調(diào)p53、p21和下調(diào)MDM2、BCL2及P-GSK-3β的水平；沉默TPD52則可下調(diào)p53、p21和上調(diào)MDM2、BCL2及P-GS