SMOC2在原發(fā)性肝細胞癌中的預后預測作用及功能的初步研究.pdf

1、背景及目的：肝癌是全球范圍內高發(fā)的一類惡性腫瘤，其中大約有90％的肝癌為原發(fā)性肝癌（HCC）。據全球癌癥調查資料顯示，肝癌發(fā)病率在所有腫瘤中排列第五，因肝癌而死亡的人數在所有惡性腫瘤中高居第三位。在中國,肝癌更是威脅我國公民生命健康的主要腫瘤之一。據中國2015年癌癥統(tǒng)計數據顯示，肝癌已成為我國實體瘤中第四位高發(fā)病率和第三位死因的癌癥。目前研究發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝癌的分子發(fā)病機制包括多基因及表觀遺傳的改變、染色體畸變、基因突變等，但關于HCC具

2、體發(fā)病機制仍不明確。因此，探索與HCC發(fā)生發(fā)展相關的潛在基因并研究其在HCC發(fā)生進展過程中的作用，對于人們更好地了解HCC發(fā)生發(fā)展的分子機制具有重要意義。
　　模塊化鈣結合蛋白2（SMOC2）屬于SPARC蛋白家族成員之一。有研究表明，SMOC2參與調節(jié)多種細胞生物學功能，如細胞周期、細胞增殖、遷移等，但關于其在腫瘤中作用的相關研究仍較少。目前，有研究利用微陣列分析技術發(fā)現(xiàn)SMOC2在多種腫瘤中呈現(xiàn)低表達，包括卵巢癌、胰腺癌等，由

3、此可推斷SMOC2在多數腫瘤中可能為抑癌基因，但目前仍未見關于SMOC2在HCC中的表達、預防診治意義及作用的研究報道。
　　本研究欲通過檢測SMOC2在HCC中的表達情況，結合肝癌患者病歷及隨訪資料來探討SMOC2表達與HCC患者臨床病理參數及預后的關系，并進一步探究SMOC2對HCC發(fā)展過程中的細胞生物學功能的影響，從而來明確SMOC2在HCC中的臨床診治、預防意義及生物學功能。
　　方法：
　　實驗方法：采用熒光

4、定量RT-PCR技術檢測SMOC2在肝癌組織中的轉錄水平，利用western blotting和免疫組織化學技術檢測SMOC2蛋白在肝癌標本和肝癌細胞中的表達，探討SMOC2與肝癌患者腫瘤相關指標的關系，并分析其表達情況與患者預后的關系。通過慢病毒轉染，構建過表達SMOC2的HepG2和Bel-7402細胞穩(wěn)株，研究SMOC2過表達后對肝癌細胞的生長活力、運動能力等的影響。
　　統(tǒng)計方法：肝癌組織和癌旁對照組織中的SMOC2在轉錄

5、水平、蛋白水平上的差異性比較及相關細胞生物學功能指標的差異性比較使用符號秩和檢驗；卡方檢驗用于分析SMOC2表達水平與HCC患者臨床病理參數間關系；生存分析用于比較SMOC2高表達組與低表達組之間總體生存期及無病進展生存期的差異；單因素、多因素Cox比例風險回歸分析用于研究SMOC2表達及臨床病理指標對HCC患者總體生存期及無病進展生存期的影響。
　　結果：
　　1、肝癌標本中SMOC2 mRNA轉錄水平（n=40，P＜0.

6、0001）和蛋白表達水平（n=40，P=0.0101）明顯低于癌旁對照組織；較正常肝細胞系L02，SMOC2在肝癌細胞系中（Bel-7402,HepG2,QGY-7701,SK-Hep1,SMMC-7721）的表達水平下調。
　　2、免疫組化結果顯示SMOC2免疫陽性染色主要處于胞漿中；卡方檢驗結果表明SMOC2表達水平的高低在腫瘤大小(χ2=9.156, P=0.002)、腫瘤數量(χ2=4.896, P=0.027)、TNM分

7、期(χ2=16.356, P＜0.001)及是否發(fā)生轉移(χ2=6.141，P=0.013)中的分布情況存在著差異；生存分析發(fā)現(xiàn)SMOC2高表達組的總生存期（OS，P＜0.001）和無病進展生存期（DFS，P=0.001）明顯長于低表達組；多因素 Cox回歸分析顯示SMOC2表達水平是影響患者預后的獨立因素。
　　3、亞組分析結果顯示在AFP≤25ng/ml或＞400ng/ml、腫瘤長徑＜5cm或≥5cm及TNM分期為Ⅰ-Ⅱ的HC

8、C患者中，SMOC2高表達組總生存率及無病進展生存率均比低表達組高（P＜0.05）。
　　4、體外實驗顯示：肝癌細胞的SMOC2表達水平上調后，細胞的增殖、克隆形成以及遷移侵襲能力受到抑制，并且會阻礙肝癌細胞周期進程，誘導細胞周期阻滯于G0/G1期。
　　5、小鼠成瘤實驗顯示皮下注射過表達SMOC2肝癌細胞的裸鼠腫瘤生長速度明顯低于對照組（P＜0.05），皮下注射過表達SMOC2肝癌細胞的裸鼠長出的腫瘤體積及重量也明顯小于對