不同生殖型懸鈴葉苧麻赤霉素代謝關(guān)鍵基因的表達(dá)分析.pdf

1、赤霉素作為一種重要的植物內(nèi)源性激素，在植物的生長發(fā)育、雄花分化等方面具有重要的作用。近來的研究發(fā)現(xiàn)，赤霉素在無融合生殖方面具有一定的作用。本研究擬根據(jù)已收集的懸鈴葉苧麻種質(zhì)作為研究材料，首先利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)染色體倍性并分析生殖類型。然后用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR對(duì)不同倍性的懸鈴葉苧麻中赤霉素代謝關(guān)鍵基因進(jìn)行定量表達(dá)分析，由此探討赤霉素對(duì)花發(fā)育和無融合生殖的影響，為懸鈴葉苧麻無融合生殖遺傳基礎(chǔ)的研究和分子機(jī)理探索提供一定的參考。
　　

2、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)懸鈴葉苧麻染色體倍性水平及生殖類型的研究表明：懸鈴葉苧麻種子的最適細(xì)胞核解離液是Galbraith解離液，在懸鈴葉苧麻中存在二倍體、三倍體以及四倍體；其中二倍體具有有性生殖和兼性無融合生殖兩種類型，三倍體是專性無融合生殖，四倍體是兼性無融合生殖。研究首次檢測(cè)到了四倍體的懸鈴葉苧麻并確定了其生殖方式。
　　在基因表達(dá)分析研究中，本文首先利用改良 CTAB法提取了懸鈴葉苧麻葉片及花序的總RN A，并逆轉(zhuǎn)錄成 c DNA。

3、然后根據(jù)懸鈴葉苧麻轉(zhuǎn)錄組的注釋信息找到了19條與赤霉素代謝相關(guān)的Unigene（包括6個(gè)BtGA2ox基因、2個(gè)BtGA20ox基因、3個(gè)BtGA3ox基因、3個(gè)BtDELLA基因、3個(gè)BtGASA基因、2個(gè)BtGID1基因）并依據(jù)它們的序列設(shè)計(jì)引物，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)不同生殖型懸鈴葉苧麻的葉和花的不同生長時(shí)期進(jìn)行基因表達(dá)分析，結(jié)果表明：
　　1.營養(yǎng)生長時(shí)期，與其它3種種質(zhì)材料不同，無花懸鈴葉苧麻植株中BtGA2ox基因、

4、BtDELLA基因高表達(dá)而BtGA20ox基因、BtGA3ox基因、BtGID1基因相對(duì)低表達(dá)量使得活性赤霉素的量嚴(yán)重減少，由此可能導(dǎo)致了懸鈴葉苧麻的矮化，花器官不分化。
　　2.在無融合生殖植株的花序中，BtGA2ox-1基因、BtGA3ox基因的表達(dá)量在花蕾I期開始明顯升高，而且 BtGID1-1基因的表達(dá)量也相應(yīng)升高，表明GA合成的上升和信號(hào)傳導(dǎo)的加強(qiáng)，從而促進(jìn)無融合植株中二倍體孢子生殖的發(fā)育。
　　3.在無融合生殖植