云南紅豆杉枝葉中活性成分的含量測定.pdf

1、中藥所含成分復(fù)雜，發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)是其內(nèi)在起協(xié)同作用的各種化學(xué)成分，傳統(tǒng)的憑借某一種化學(xué)成分定性和定量的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，難以有效地評(píng)價(jià)中藥，特別是復(fù)方中藥的真?zhèn)蝺?yōu)劣。天然藥物傳統(tǒng)提取方法不僅會(huì)導(dǎo)致現(xiàn)有天然藥物質(zhì)量難控制、療效不穩(wěn)定、實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性差、溶劑殘留等問題，而且對(duì)環(huán)境也造成嚴(yán)重的污染。因此，借助現(xiàn)代高新技術(shù)手段，改革傳統(tǒng)的提藥制藥工藝，尋找新的提取方法，采用清潔無污染的工藝對(duì)環(huán)境保護(hù)具有十分重要的意義，如何建立客觀、全面、有

2、效的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)方法是目前中藥現(xiàn)代化進(jìn)程中急需解決的問題之一。高效液相具有高靈敏度、高效率、實(shí)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，由于HPLC所具有的高分離效能和廣泛適用性，是應(yīng)用于中藥指紋圖譜的最常見的分析技術(shù)手段。 紫杉在《中國植物志》中的學(xué)名為紅豆杉，植物分類為裸子植物亞門，松杉綱，紫杉目，紅豆杉科，紅豆杉屬。紅豆科含5屬23種，我國有4種和一個(gè)變種，分別為西藏紅豆杉或喜馬拉雅紅豆杉、云南紅豆杉、南方紅豆杉和東北紅豆杉。雖然分布廣泛，但數(shù)量稀

3、少，較為分散，極少成林且生長緩慢。云南省是我國紅豆杉資源的主要分布區(qū)域，而云南紅豆杉在云南的3種紅豆杉中無論株數(shù)或蓄積量都占99.6％以上。因此，云南紅豆杉已成為我國紫杉醇藥物生產(chǎn)的主要樹種。紫杉醇作為紅豆杉中抗癌活性成分已得到廣泛的研究開發(fā)，但其主要存在于樹皮中，含量僅為0.01％-0.08％，每提取1kg紫杉醇就要砍伐1000至2000棵成年樹，僅僅美國每年就需要至少20kg的紫杉醇，由于樹皮被剝?nèi)。瑯淠緹o法存活，導(dǎo)致了紫杉醇價(jià)比黃

4、金。在紅豆杉樹木中，紫杉醇并非唯一的抗癌活性成分，紫杉烷萜類化合物不但自身有抗癌活性，而且可作為合成紫杉醇或其類似物的前體，其主要存在于紅豆杉樹皮和枝葉中，而且含量較紫杉醇高數(shù)十倍，因此對(duì)紅豆杉資源中紫杉烷萜類評(píng)價(jià)分析具有重要意義。 紫衫醇是一種對(duì)腫瘤有抑制作用的三環(huán)二萜類化合物，其抗癌機(jī)理獨(dú)特，對(duì)各類癌癥都有特殊的療效。近年來，紫衫醇成為了天然植物藥物領(lǐng)域中最熱點(diǎn)的新藥。但由于紫衫醇在植物體中含量僅萬分之幾，使得紫衫醇的分離純

5、化非常困難，因此建立一種高效的分離純化方法便顯得尤為重要。 本文利用高效液相色譜法對(duì)不同來源的云南紅豆衫進(jìn)行了分析，采用正交設(shè)計(jì)方法L9(34)對(duì)樣品制備方法進(jìn)行了篩選并對(duì)色譜條件進(jìn)行了系統(tǒng)優(yōu)化，使所得HPLC指紋圖譜不但分離效果好而且信息量大，適合云南紅豆衫的質(zhì)量控制。利用C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)，甲醇-乙腈-水(22∶38∶40)和甲醇-乙腈-水(5∶35∶60)分別作為流動(dòng)相，檢測波長為227nm，柱

6、溫30℃，流速1.0ml/min，測定紫杉醇、三尖杉寧堿和10-去乙酰巴卡亭Ⅲ。此方法可靠簡便、重現(xiàn)性好、靈敏度高，具有很高的實(shí)用價(jià)值，可用于紅豆杉植物中紫杉醇、10-脫乙酰巴卡亭Ⅲ的定性、定量分析。并利用建立的指紋圖譜考察了云南紅豆衫的采收期、采集地點(diǎn)、采集年份以及儲(chǔ)藏期等對(duì)藥材內(nèi)在質(zhì)量的影響。 本研究的完成為云南紅豆衫的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了完善的高效液相色譜指紋圖譜方法，為云南紅豆衫的臨床應(yīng)用和再次開發(fā)提供了科學(xué)地依據(jù)，為中藥指紋