曼地亞紅豆杉枝葉中活性成分的含量測(cè)定研究.pdf

1、　　目的：本研究對(duì)曼地亞紅豆杉枝葉中紫杉醇、三尖杉寧堿和10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的提取分離工藝和含量測(cè)定方法進(jìn)行了系統(tǒng)研究,并分析了不同采收期、不同生長(zhǎng)年限和不同采集地曼地亞紅豆杉枝葉中這 3 種目標(biāo)成分含量的變化規(guī)律。最終建立了曼地亞紅豆杉枝葉中紫杉醇、三尖杉寧堿和10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的質(zhì)量控制方法。另外,本實(shí)驗(yàn)還對(duì)曼地亞紅豆杉和南方紅豆杉針葉中的揮發(fā)性成分進(jìn)行了比較分析,為曼地亞紅豆杉這一珍稀藥用資源的有效利用奠定基礎(chǔ)。
　　方

2、法：(1)對(duì)浸提法和超聲提取法分別進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)優(yōu)化,而后利用正交實(shí)驗(yàn)分別對(duì)這兩種提取方法進(jìn)行優(yōu)化,比較優(yōu)化后兩種提取方法的提取液中紫杉醇10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的含量以及其他工藝參數(shù),從而確定一種曼地亞紅豆杉枝葉的最佳提取工藝。(2)通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)提取液中的紫杉烷類(lèi)成分的萃取工藝進(jìn)行了優(yōu)化研究。(3)對(duì)用于曼地亞紅豆杉枝葉中的紫杉醇、三尖杉寧堿和10-去乙酰巴卡亭Ⅲ含量測(cè)定的UPLC法進(jìn)行色譜系統(tǒng)優(yōu)化和方法學(xué)考察。(4)采用UPLC法對(duì)

3、不同采收期、不同生長(zhǎng)年限和不同采集地的曼地亞紅豆杉枝葉中紫杉醇、三尖杉寧堿和10-去乙酰巴卡亭Ⅲ的含量進(jìn)行測(cè)定分析,并研究了不同樣品中3種目標(biāo)成分含量的變化規(guī)律。(5)采用水蒸氣蒸餾法分別提取曼地亞紅豆杉和南方紅豆杉針葉中的揮發(fā)油后,利用GC-MS法對(duì)其揮發(fā)性成分進(jìn)行了分離鑒定。
　　結(jié)果：(1)超聲提取法比浸提法明顯優(yōu)越,在將目標(biāo)成分提取完全的情況下,采用超聲提取,不僅節(jié)約時(shí)間和溶劑,而且提高效率。超聲提取法的最佳工藝如下：提

4、取溫度在35~45℃之間,料液比為1：30,提取時(shí)間為30min,提取次數(shù)為3次。(2)分離除雜優(yōu)化工藝為,用石油醚進(jìn)行脫色除雜,每次30mL,直至石油醚萃取物近無(wú)色后。殘?jiān)屑尤?5mL的蒸餾水和30mL二氯甲烷繼續(xù)萃取,然后再用30mL二氯甲烷萃取兩次,收集二氯甲烷萃取液,45℃下減壓真空濃縮即可。(3) 優(yōu)化后的色譜條件如下：Acquity BEH Shield RP18色譜柱( 2.1 mm×100 mm, 1.7μm )；流動(dòng)

5、相為水-乙腈(A-B), 梯度洗脫( 0~8 min, 78%A；8~11 min, 78%A→65%A, 11~44 min, 65%A)；流速為0.2 mL·min-1,柱溫25℃,檢測(cè)波長(zhǎng)為227 nm。(4) 川產(chǎn)和浙產(chǎn)曼地亞紅豆杉枝葉中這 3 種目標(biāo)成分的含量差別較大,其中川產(chǎn)曼地亞紅豆杉針葉中三尖杉寧堿的含量高于浙產(chǎn)曼地亞紅豆杉針葉,但川產(chǎn)曼地亞紅豆杉針葉中10-DABⅢ和紫杉醇的含量和小枝中三種有效成分的含量均低于浙產(chǎn)曼地

6、亞紅豆杉；但川產(chǎn)曼地亞紅豆杉針葉中 10-DABⅢ和紫杉醇的含量和小枝中這三種目標(biāo)成分的含量均低于浙產(chǎn)曼地亞紅豆杉；曼地亞紅豆杉針葉中目標(biāo)成分的含量遠(yuǎn)大于小枝；浙產(chǎn)曼地亞紅豆杉枝葉的最佳采收期預(yù)測(cè)為5月中旬左右。(5) 從曼地亞紅豆杉揮發(fā)油中共鑒定出34個(gè)成分,從南方紅豆杉揮發(fā)油中共鑒定出 35 個(gè)成分。其中有 19 個(gè)化合物是曼地亞紅豆杉和南 方紅豆杉針葉揮發(fā)油的共有成分,這些共有成分對(duì)紅豆杉屬植物的歸屬可能會(huì)有一定的參考價(jià)值。