慢病毒載體介導(dǎo)分化抑制因子-1 RNAi對人涎腺腺樣囊性癌生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：⑴研究涎腺腺樣囊性癌中Id-1的表達，并比較其和臨床病理間的聯(lián)系。⑵構(gòu)建慢病毒載體基礎(chǔ)上的Id-1RNA干擾系統(tǒng)，研究RNA干擾Id-1表達對涎腺腺樣囊性癌的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的影響。 方法：①采用免疫組化技術(shù)、real-time PCR技術(shù)以及western blot技術(shù)研究涎腺腺樣囊性癌石蠟標本和ACC-M和ACC-2細胞系中Id-1的表達，并比較其和臨床病理間的聯(lián)系。②通過RNA干擾技術(shù)，建立慢病毒載體基礎(chǔ)上的Id-1

2、RNA干擾穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的ACC-M細胞株。③采用MTT、流式細胞儀、克隆形成實驗和動物試驗研究Id-1RNA干擾對涎腺腺樣囊性癌增殖的影響。④采用Transwell侵襲實驗和動物實驗研究Id-1RNA干擾對涎腺腺樣囊性癌侵襲和轉(zhuǎn)移的影響。 結(jié)果：⑴Id-1表達在涎腺腺樣囊性癌轉(zhuǎn)移組和無轉(zhuǎn)移組之間差異具有顯著性(P<0.05)；Id-1表達在涎腺腺樣囊性癌臨床I-II期和III-IV期之間差異具有顯著性(P<0.05)。ACC-M細胞

3、中Id-1基因和蛋白水平高于ACC-2細胞的表達。⑵限制性內(nèi)切酶酶切和DNA序列測定Id-1表達載體證實，目的片段己正確插入載體且插入片段序列正確。實驗證實慢病毒滴度達到107 TU/ml該病毒感染ACC-M細胞經(jīng)篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株，經(jīng)real time PCR和Western blot分析表明，Id-1mRNA和蛋白表達水平出現(xiàn)了明顯的敲減效應(yīng)。⑶Id-1 RNA干擾后，對ACC-M細胞增殖能力無明顯影響。⑷Id-1RNA干擾體外