慢病毒載體介導(dǎo)分化抑制因子-1 RNAi對(duì)人涎腺腺樣囊性癌生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：⑴研究涎腺腺樣囊性癌中Id-1的表達(dá)，并比較其和臨床病理間的聯(lián)系。⑵構(gòu)建慢病毒載體基礎(chǔ)上的Id-1RNA干擾系統(tǒng)，研究RNA干擾Id-1表達(dá)對(duì)涎腺腺樣囊性癌的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的影響。 方法：①采用免疫組化技術(shù)、real-time PCR技術(shù)以及western blot技術(shù)研究涎腺腺樣囊性癌石蠟標(biāo)本和ACC-M和ACC-2細(xì)胞系中Id-1的表達(dá)，并比較其和臨床病理間的聯(lián)系。②通過(guò)RNA干擾技術(shù)，建立慢病毒載體基礎(chǔ)上的Id-1

2、RNA干擾穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的ACC-M細(xì)胞株。③采用MTT、流式細(xì)胞儀、克隆形成實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物試驗(yàn)研究Id-1RNA干擾對(duì)涎腺腺樣囊性癌增殖的影響。④采用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究Id-1RNA干擾對(duì)涎腺腺樣囊性癌侵襲和轉(zhuǎn)移的影響。 結(jié)果：⑴Id-1表達(dá)在涎腺腺樣囊性癌轉(zhuǎn)移組和無(wú)轉(zhuǎn)移組之間差異具有顯著性(P<0.05)；Id-1表達(dá)在涎腺腺樣囊性癌臨床I-II期和III-IV期之間差異具有顯著性(P<0.05)。ACC-M細(xì)胞

3、中Id-1基因和蛋白水平高于ACC-2細(xì)胞的表達(dá)。⑵限制性內(nèi)切酶酶切和DNA序列測(cè)定Id-1表達(dá)載體證實(shí)，目的片段己正確插入載體且插入片段序列正確。實(shí)驗(yàn)證實(shí)慢病毒滴度達(dá)到107 TU/ml該病毒感染ACC-M細(xì)胞經(jīng)篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株，經(jīng)real time PCR和Western blot分析表明，Id-1mRNA和蛋白表達(dá)水平出現(xiàn)了明顯的敲減效應(yīng)。⑶Id-1 RNA干擾后，對(duì)ACC-M細(xì)胞增殖能力無(wú)明顯影響。⑷Id-1RNA干擾體外