太平洋牡蠣多糖的提取、分離、結構及硫酸酯化修飾研究.pdf

1、牡蠣(Concha Ostreae)資源豐富,肉味鮮美,營養(yǎng)價值較高,素有“海底牛奶”的美稱。牡蠣肉中含有豐富的多糖,具有良好的免疫調節(jié)、抗氧化、抗病毒和降血糖活性。本實驗以來源于青島海域的新鮮太平洋牡蠣(Crassostrea gigas)為原料,采用不同的提取和層析分離方法得到了5種多糖組分,并對其中的1種水溶性多糖純化組分 CT-11的結構進行了較為系統(tǒng)的研究。通過對CT-11硫酸酯化修飾,制備得到了1種牡蠣多糖硫酸酯,并對其體外

2、抗凝和抗腫瘤活性進行了初步的評價。
　　本文依次采用常溫水、60℃熱水、稀堿溶液對牡蠣多糖進行了提取,采用胃蛋白酶和胰蛋白酶雙酶法對粗多糖進行去蛋白,分別得到了常溫提牡蠣粗多糖(CT)、熱水提牡蠣粗多糖(RT)和堿提牡蠣粗多糖(JT)3種粗多糖,得率分別為16.1％、1.9%和13.3%。采用硫酸-苯酚法和Folin-酚法分別測得CT的總糖含量為87.4%,蛋白含量10.4%;RT的總糖含量67.9%,蛋白含量21.8%;JT的總

3、糖含量為42.9%,蛋白含量47.7%。采用PMP柱前衍生高效液相色譜法測得3種粗多糖均為葡聚糖,高效凝膠滲透色譜法聯(lián)合多角度激光散射儀測定其分子量分別為2.1×106 Da,2.0×106 Da和9.8×105 Da。
　　本文對3種粗多糖 CT、RT和JT,分別采用 DEAE Sepharose FF陰離子交換層析和 Sepharcryl S-400凝膠層析進行了分離和純化,獲得了CT-11、CT-21、RT-11、RT-21

4、和JT-11等5個純化多糖組分。對其中得率較高的CT-11進行了基本理化性質測定,結果表明其總糖含量為95.1%,蛋白含量為4.7%,相對分子質量為1299 kDa,而且其高效液相色譜峰形對稱,表明具有較高的純度。采用紅外光譜(IR)、電噴霧質譜(ESI-MS)、甲基化、氣質聯(lián)用(GC-MS)和核磁共振波譜(NMR)對 CT-11的化學結構進行了分析,確定其結構是以→4)-α-D-Glc-(1→為主,含有→3,4)-β-D-Glc(1→

5、和→2,4)-β-D-Glc(1→的吡喃葡聚糖。
　　本文分別采用SO3-吡啶法和氯磺酸-甲酰胺法對 CT-11進行了硫酸酯化修飾,獲得了2種硫酸酯化多糖 CT-S1和 CT-S2,測得其硫酸根含量分別為36.2%和43.1%。對硫酸酯化程度較高的CT-S2進一步分析,測得其分子量為11.2 kDa,硫酸根取代度為1.34。通過IR和NMR可確定 CT-S2的硫酸酯反應主要發(fā)生在(1→4)-Glc的 C-6位,在C2和C3位也存在

6、硫酸基取代。
　　本文對CT-S2的體外抗凝和抗腫瘤活性進行了初步評價,結果表明:CT-S2具有顯著延長活化部分凝血酶時間(APTT)和凝血酶時間(TT)的作用,但對凝血酶原時間(PT)影響不大,表明其抗凝作用主要是通過內源性凝血系統(tǒng)途徑實現(xiàn); CT-S2對人結腸癌細胞HCT-116具有明顯的抑制活性,對人早幼粒白血病細胞HL-60和人肺腺癌細胞A-549細胞也具有一定的抑制作用,并存在量效關系,但對人宮頸癌細胞hela和人肺腺癌