二巰丁二酸藥物代謝動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)、毒性及驅(qū)鉛作用研究.pdf

1、[目的] 建立生物樣品中二巰丁二酸的測(cè)定方法，研究二巰丁二酸在小鼠體內(nèi)的組織分布動(dòng)力學(xué)及人體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)特征，探討二巰丁二酸急性毒性及驅(qū)鉛作用。 [方法] 1．考察二巰丁二酸及其衍生化物的穩(wěn)定性，探討測(cè)定的最佳條件，包括反應(yīng)液pH、反應(yīng)時(shí)間和熒光試劑mBBr的用量，建立生物樣品中二巰丁二酸的測(cè)定方法。 2．急性毒性試驗(yàn)20只昆明小鼠，雌雄各半，體重21.2±2.3g，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天，按體重隨機(jī)分為對(duì)照組和

2、試驗(yàn)組，給藥前禁食12h，試驗(yàn)組每只小鼠于24h內(nèi)分4次經(jīng)口給予DMSA 160mg，對(duì)照組給予等體積的生理鹽水，觀察1周，然后摘除眼球取血，處死小鼠，取其腦、心臟、肝臟和腎臟，生理鹽水清洗，測(cè)定BUN、Scr、AST、ALT、SOD、GSH-PX、MDA及機(jī)體必需微量元素等指標(biāo)。 3．驅(qū)鉛試驗(yàn)60只昆明小鼠，雌雄各半，體重21.3±2.0g，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天，按體重隨機(jī)分為對(duì)照組(20只，雌雄各半)和試驗(yàn)組(40只，雌雄各半)，

3、試驗(yàn)組腹腔注射醋酸鉛1mg.d<'-1>.g<'-1>，對(duì)照組給予等量的生理鹽水，持續(xù)1周。染毒結(jié)束后，適應(yīng)性喂養(yǎng)1天，分別將對(duì)照組和試驗(yàn)組小鼠隨機(jī)分入Ⅰ、Ⅱ兩大組，各組內(nèi)有3小組，分別為：A，陰性對(duì)照組；B，陽(yáng)性對(duì)照組；C，DMSA治療組。小鼠經(jīng)口給藥，兩大組給藥頻率及次數(shù)分別為：Ⅰ組治療組給予0.5mL2.6mg.mL<'-1>DMSA溶液，1同3次，連續(xù)3天；Ⅱ組治療組給予0.5mL2.6mg.mL<'-1>DMSA溶液，1日2次

4、，隔同給藥，共10次；其余組給予等量的生理鹽水。小鼠于最后1次給藥后24h摘除眼球取血，處死小鼠，取其腦、心臟、肺臟、肝臟、腎臟、股骨及骨骼肌，測(cè)定BUN、Scr、AST、ALT、SOD、GSH-PX、MDA及機(jī)體鉛水平和必需微量元素等指標(biāo)。 4.組織分稚試驗(yàn)36只昆明小鼠，雌雄各半，體重18.7±1.3g，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天，按體重隨機(jī)分為6組(每組6只小鼠，雌雄各半)，1組為空白組，其余5組為給藥組，給藥前禁食12h，自由飲水

5、。給藥組經(jīng)口給予0.5mL 2.6mg·mL<'-1>DMSA溶液，分別于給藥后0.5、2、4、6和12h摘眼球取血，立即置于肝素化試管；處死小鼠，迅速取其腦、心臟、肺臟、腸、肝臟、脾臟和腎臟，用生理鹽水沖洗血污，并用濾紙吸干表面水分，制備組織勻漿，采用HPLC-熒光檢測(cè)技術(shù)測(cè)定血液及組織中藥物濃度，考察二巰丁二酸組織分布特征。 5.人體藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn) 20名男性健康志愿者，體格檢查合格，年齡23.1±1.94歲，體重65.8±

6、6.47kg。志愿者于試驗(yàn)前一天晚10時(shí)后禁食，試驗(yàn)當(dāng)日晨抽耿空白血樣和留取空白尿后，立即空腹口服DMSA試驗(yàn)制劑500mg，200mL溫開(kāi)水送服。于藥后0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、12.0、24.0h取肘靜脈血4mL，分2份置于肝素化試管中，1份立即于-70℃貯存?zhèn)錅y(cè)，另1份制備血漿于-70℃貯存?zhèn)錅y(cè)。收集藥后0～2 h，2～4 h，4～6 h，6～8 h，8～12h及12～24h全

7、部尿液，記錄每個(gè)樣本體積，取10mL于-70℃貯存?zhèn)錅y(cè)。采用HPLC-熒光檢測(cè)技術(shù)測(cè)定血液、血漿及尿中原型和總DMSA，評(píng)價(jià)二巰丁二酸人體藥代動(dòng)力學(xué)特征及其在存在形式。 [結(jié)果] 1.DMSA在室溫、自然光下放置迅速氧化，在-20℃冰柜中、避光可以穩(wěn)定存在。當(dāng)pH值大于5時(shí)，衍生化程度最大，本試驗(yàn)采用pH 8.2。DMSA與mBBr反應(yīng)迅速，反應(yīng)5min內(nèi)即可完成。反應(yīng)液中mBBr濃度大于DMSA濃度的20倍即可。mBB

8、r-DMSA衍生化物，在pH值1～9范圍內(nèi)，可以穩(wěn)定存在。 2.急性毒性試驗(yàn)給予大劑量DMSA，小鼠出現(xiàn)消化道癥狀，進(jìn)食減少，體重降低，腹腔輕度積水；BUN和Scr水平顯著性升高(P<0.001)，可能對(duì)腎臟產(chǎn)生損傷；血氨基轉(zhuǎn)移酶升高(P<0.001)，肝、腎氨基轉(zhuǎn)移酶無(wú)顯著性變化(P>0.05)，對(duì)肝臟存在急性毒性作用；給予大劑量DMSA能抑制機(jī)體抗氧化系統(tǒng)，腦組織、肝臟和腎臟SOD活性降低，但無(wú)顯著性(P>0.05)：同時(shí)錳

9、、銅、鋅等微量元素也有變化，提示SOD活性降低可能與相關(guān)元素變化有關(guān)。GSH-PX活性明顯降低(P<0.01)，但是機(jī)體硒含量變化不明顯(P>0.05)，提示GSH-PX活性降低與組織硒含量無(wú)關(guān)，可能是DMSA與GSH-PX的巰基反應(yīng)生成二硫化物所致；大劑量DMSA損傷小鼠肝細(xì)胞，肝臟MDA顯著性升高(P<0.01)。 3．驅(qū)鉛試驗(yàn)鉛中毒后BUN、Scr和血氨基轉(zhuǎn)移酶顯著性升高(P<0.05)，肝臟氨基轉(zhuǎn)移酶活性顯著性降低(P

10、<0.05)；DMSA治療后，BUN和Scr水平進(jìn)一步升高，但無(wú)顯著性(P>0.05)，可能與DMSA、鉛以及螯合物經(jīng)腎臟排泄有關(guān)，肝功能增強(qiáng)。鉛中毒后機(jī)體抗氧化系統(tǒng)受到明顯抑制(P<0.01)，DMSA改善機(jī)體抗氧化功能，對(duì)肝腎具有保護(hù)作用。鉛與機(jī)體能的微量元素競(jìng)爭(zhēng)，導(dǎo)致機(jī)體微量元素失衡，特別是錳、銅、鋅等元素水平有所降低，可能與SOD活性降低有關(guān)；DMSA能與多種元素螯合，影響機(jī)體微量元素水平。 4．組織分布試驗(yàn) DMSA在

11、小鼠體內(nèi)分布動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果顯示，DMSA分布廣泛，主要分布于腎臟，其次為血液、腸、肺臟、肝臟、脾臟、心臟和腦。DMSA的分布特點(diǎn)表明其對(duì)腎臟和肝臟等臟器的損傷較重，主要通過(guò)肝腎代謝，腦組織分布較少，但其能有效降低腦鉛水平。血液、腸、肝臟和心臟在給藥后0.5h藥物濃度達(dá)峰值，腎臟、肺臟、脾臟和腦于給藥后2h藥物濃度達(dá)峰值。 5．人體藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn) DMSA人體藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)：t<,1/2>為7.94±2.10h，C<,max>(為

12、3.77±1.26μg·mL<'-1>，t<,max>為2.45±0.22h，AUC為24.35±7.37)μg·mL<'-1>·h，nAUC為27.63±8.42μg·mL<'-1>·h，aumc為188.24±51.89μg·mL<'-1>，MRT為7.81±0.50h，Ke為0.99±0.70 h<'-1>，Vd為1.10±0.70 L·kg<'-1>，CL為0.33±0.11 L·kg<'-1>·h<'-1>。血液中約有50﹪的

13、DMSA以原型形式存在；血漿中檢測(cè)不到原型DMSA，血漿總DMSA用紅細(xì)胞比容調(diào)整后與血液總DMSA比較，二者之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)，表明DMSA不進(jìn)入血細(xì)胞；DMSA 24h排泄量占給藥量的30.18﹪～47.74﹪，其中原型僅占排泄量的0.26﹪～1.54﹪，故DMSA大部分經(jīng)尿排泄，但僅有微量的DMSA以原型排泄。 【結(jié)論】 本試驗(yàn)建立了測(cè)定生物樣品中DMSA的方法，該方法簡(jiǎn)單易行、省時(shí)、準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性

14、好。 口服DMSA后，DMSA迅速吸收，并在體內(nèi)廣泛分布，主要分布于腎臟，其次為血液、腸、肺臟、肝臟、脾臟、心臟和腦。DMSA的分布特點(diǎn)表明其對(duì)腎臟和肝臟等臟器的損傷作用，主要通過(guò)肝腎代謝，腦組織分布較少，但能有效降低腦鉛水平。 大劑量的DMSA對(duì)肝腎損傷較重，且能抑制機(jī)體抗氧化系統(tǒng)的功能，對(duì)機(jī)體微量元素的平衡有所影響。治療劑量的DMSA，能有效降低機(jī)體鉛含量，有保護(hù)肝腎的作用，改善鉛中毒引起的機(jī)體微量元素失衡，但也可降