CXCR4下調(diào)對(duì)乳腺癌轉(zhuǎn)移影響的初步研究.pdf

1、分類(lèi)號(hào)；R 7 3 0 ．2碩士研究生學(xué)位論文Y 7 6 2 6 7 6 、單位代碼：1 1 9 0 4學(xué) 號(hào)：2 0 0 2 2 0 1 2C X C R 4 下調(diào)對(duì)乳腺癌轉(zhuǎn)移影響的初步研究T h e P r e l i m i n a r yS t u d y o n E f f e c t o fD o w n —r e g u l a t i o no f C X C I Ⅵo n B r e a s tC a n c e r

2、M e t a s t a s i s專(zhuān)業(yè)：生物化學(xué)及分子生物學(xué)研究生：李臣賓導(dǎo)師：牛瑞芳研究員天津醫(yī)科大學(xué)二零零五年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文篩選轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞，進(jìn)行克隆化，擴(kuò)大培養(yǎng)。用流式細(xì)胞儀從蛋白質(zhì)水平檢測(cè)C X C R 4 表達(dá)率，用實(shí)時(shí)熒光定量P C R 從轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)C X C R 4 基因表達(dá)受抑制情況。第二部分：選用M T T 法繪制細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線和平板克隆形成實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞的增殖能力進(jìn)行觀察；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了細(xì)胞的

3、早期凋亡情況；采用M a t r i g e l I n v a s i o nC h a m b e r s 實(shí)驗(yàn)對(duì)細(xì)胞的遷移能力和侵襲力進(jìn)行了衡量。最后，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量P C R 檢測(cè)了E ．鈣粘蛋白( E ．c a d h e r i n ，E —c a d ) 、胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白5 ( i n s u l i n —l i k e g r o w t h f a c t o r - b i n d i n g p r

4、o t e i n 5 ．I G F B P - 5 ) 、纖維粘連蛋白( f i b r o n e c t i n ，F(xiàn) N ) 和基質(zhì)金屬蛋白酶一2 ( M a r t i xm e t a l l o p r o t e i n a s e - - 2 ，M M P - 2 ) 等與乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達(dá)情況。結(jié)果：第一部分：1 成功地構(gòu)建了四種能夠表達(dá)s i R N A 的質(zhì)粒p S l i e n e e r 3 ．1 一

5、H 1n e o ／s i R N A ，通過(guò)限制型內(nèi)切酶酶切圖譜和測(cè)序分析，證實(shí)插入載體的核苷酸序列和設(shè)計(jì)完全符合。2 轉(zhuǎn)染四種純化后的質(zhì)粒到T 4 7 D 細(xì)胞中，經(jīng)( 3 4 1 8 篩選出了三種轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞( T 4 7 D ／s i R N A l 、T 4 7 D ／s i R N A 3 和T 4 7 D ／s i R N A 4 ) 。3 經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)，親本T 4 7 D 細(xì)胞的C X C R 4 表達(dá)率為6 9

6、．o o ％，T 4 7 D ／s i R N A l 、T 4 7 D ／s i R N A 3 和T 4 7 D ／s i R N A 4 等三種轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞的表達(dá)率分別為4 ．9 5 ％、1 1 ．1 0 ％和5 ．5 3 ％。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理認(rèn)為，親本T 4 7 D 細(xì)胞的C X C R 4 表達(dá)率與三種轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞比較差異有顯著性( P0 ．0 5 ) 。4 實(shí)時(shí)熒光定量P C R 檢測(cè)結(jié)果是T 4 7 D ／s i R N A