原發(fā)性乳腺癌VEGF-C、CXCR4表達(dá)與腫瘤淋巴管生成及淋巴轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究.pdf

1、第一章原發(fā)性乳腺癌VEGF-C/Flt-4的表達(dá)與腫瘤淋巴管生成的定位研究目的研究淋巴管生長(zhǎng)因子VEGF-C及其受體Flt-4在原發(fā)性乳腺癌(primarybreastCarcinoma)組織中的表達(dá)，探討VEGF-C/Flt-4與乳腺癌腫瘤淋巴管生成、臨床、病理和相關(guān)參數(shù)的關(guān)系。 方法應(yīng)用分子生物學(xué)原位雜交方法檢測(cè)VEGF-CmRNA基因和免疫組織化學(xué)S-P方法檢測(cè)Flt-4蛋白在89例原發(fā)性乳腺癌組織中的表達(dá)，同時(shí)應(yīng)用免疫組

2、織化學(xué)S-P方法標(biāo)記乳腺癌腫瘤淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞透明質(zhì)酸酶受體(LYVE-1)和HE染色無(wú)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的腋淋巴結(jié)的CK-19蛋白，探討VEGF-C/Flt-4表達(dá)與乳腺癌腫瘤淋巴管生成、月經(jīng)狀態(tài)、臨床分期、腫塊大小、病理類型、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(含微小轉(zhuǎn)移)、nm23和c-erbB-2的聯(lián)系。 結(jié)果在89例原發(fā)性乳腺癌組織中，49例表達(dá)VEGF-CmRNA，表達(dá)率為55.06％。VEGF-CmRNA的表達(dá)與乳腺癌組織Flt-4的表達(dá)、淋巴管

3、密度(LVD)和腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，與VEGF-CmRNA陰性組比較，VEGF-CmRNA陽(yáng)性組的Flt-4表達(dá)率高，腫瘤淋巴管密度大，腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高，P均＜0.05；但VEGF-CmRNA的表達(dá)與病人月經(jīng)狀態(tài)、腫塊大小、臨床分期、病理類型、nm23和c-erbB-2無(wú)關(guān)，P均＞0.05。43例Flt-4呈陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率48.31％。Flt-4表達(dá)與乳腺癌腫瘤淋巴管生成有關(guān)，F(xiàn)lt-4表達(dá)越高，腫瘤淋巴管密度越大，P＜0.05。但

4、Flt-4表達(dá)與病人月經(jīng)狀態(tài)、腫塊大小、臨床分期、病理類型、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、nm23和c-erbB-2無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P均＞0.05。VEGF-CmRNA和Flt-4在正常乳腺組織無(wú)表達(dá)。所有病例均有不同程度的腫瘤淋巴管生成，但以腫瘤間質(zhì)組織中淋巴管生成為主，癌巢中未見(jiàn)到明顯的成形淋巴管。腫瘤淋巴管密度與乳腺癌臨床分期和腫瘤腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正比，臨床分期越晚，腫瘤淋巴管密度越高，＜0.05；腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的腫瘤淋巴管密度比無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高，P

5、＜0.05。但腫瘤淋巴管密度也與病人的月經(jīng)狀態(tài)、腫瘤腫塊大小、病理類型、nm23和c-erbB-2無(wú)關(guān)，P均＞0.05。 小結(jié)1.原發(fā)性乳腺癌組織VEGF-CmRNA的表達(dá)與乳腺癌腫瘤淋巴管生成、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，VEGF-CmRNA陽(yáng)性表達(dá)組的乳腺癌腫瘤淋巴管密度和腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率均高于VEGF-CmRNA陰性表達(dá)組。 2.VEGF-C/Flt-4介導(dǎo)的乳腺癌腫瘤淋巴管生成主要發(fā)生在腫瘤間質(zhì)組織中，癌巢實(shí)質(zhì)內(nèi)未見(jiàn)到明

6、顯的成形淋巴管。作者認(rèn)為腫瘤淋巴管實(shí)質(zhì)上主要是腫瘤間質(zhì)淋巴管。 3.原發(fā)性乳腺癌組織腫瘤淋巴管密度與乳腺癌腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，淋巴管密度越高，腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的機(jī)率也越大。 第二章VEGF-C、CXCR4與乳腺癌淋巴轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究目的研究血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF-C與趨化因子受體CXCR4在乳腺癌器官親嗜性轉(zhuǎn)移中的相互關(guān)系和在腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制，為探索干預(yù)乳腺癌淋巴道轉(zhuǎn)移的新方法提供理論依據(jù)。 方法采用分子生物學(xué)

7、RT-PCR方法研究45例原發(fā)性乳腺癌組織中VEGF-CmRNA、趨化因子受體CXCR4mRNA的表達(dá)；應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)乳腺癌組織中雌激素受體ER，分析三者之間在乳腺癌淋巴轉(zhuǎn)移中的內(nèi)在關(guān)系及相互聯(lián)系；通過(guò)Boyden趨化小室法檢測(cè)趨化因子SDF-1對(duì)乳腺癌細(xì)胞的趨化活性和侵襲性及趨化抑制性和侵襲抑制性的影響。 結(jié)果45例原發(fā)性乳腺癌組織均有不同程度的CXCR4mRNA表達(dá)，其中37例呈高表達(dá)，18例低表達(dá)。CXCR4mR

8、NA的表達(dá)與乳腺癌腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，CXCR4mRNA高表達(dá)率組的腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率明顯高于CXCR4mRNA低表達(dá)率組，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。CXCR4mRNA的表達(dá)與VEGF-CmRNA的表達(dá)呈正相關(guān)，與CXCR4mRNA低表達(dá)組相比較，CXCR4mRNA高表達(dá)組的VEGF-CmRNA表達(dá)率也高，P＜0.05。但CXCR4mRNA表達(dá)的高低與乳腺癌病人月經(jīng)狀態(tài)、臨床分期、病理類型無(wú)關(guān)聯(lián)，P均＞0.05。CXCR4的配體S

9、DF-1對(duì)乳腺癌細(xì)胞的平均趨化活性率達(dá)75％，經(jīng)抗CXCR4單克隆抗體處理后癌細(xì)胞的平均趨化活性率下降至34％，CXCR4被封閉前后的癌細(xì)胞趨化活性率有明顯的差異，P＜0.05。經(jīng)RT-PCR法檢測(cè)45例乳腺癌組織中的VEGF-CmRNA，33例VEGF-CmRNA呈高表達(dá)，高表達(dá)率為73.33％，其表達(dá)與乳腺癌腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的VEGF-CmRNA的高表達(dá)率明顯高于腋淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移組，P＜0.05。VEGF-CmRNA的

10、表達(dá)與乳腺癌病人月經(jīng)狀態(tài)、臨床分期、病理類型無(wú)關(guān)，P均＞0.05。ER表達(dá)與CXCR4mRNA和VEGF-CmRNA的表達(dá)無(wú)關(guān)，P均＞0.05。 小結(jié)1乳腺癌趨化因子受體CXCR4的表達(dá)與乳腺癌VEGF-C的表達(dá)呈正相關(guān)。 2CXCR4的表達(dá)和乳腺癌腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分別受VEGF-C和趨化因子SDF-1的調(diào)控。趨化因子及其受體對(duì)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的作用既反映了腫瘤細(xì)胞自身的特性，又顯示出被轉(zhuǎn)移器官的環(huán)境特征，說(shuō)明腫瘤的轉(zhuǎn)移是一個(gè)

11、復(fù)雜的過(guò)程。 結(jié)論1.VEGF-C在原發(fā)性乳腺癌組織中的表達(dá)與乳腺癌腫瘤淋巴管生成和腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，VEGF-C/Flt-4信號(hào)通路介導(dǎo)腫瘤淋巴管生成可能是腫瘤淋巴管網(wǎng)構(gòu)建的主要機(jī)制。 2.原發(fā)性乳腺癌腫瘤淋巴管生成主要存在于腫瘤間質(zhì)中，腫瘤實(shí)質(zhì)內(nèi)未見(jiàn)到明顯的成形淋巴管，因此，腫瘤淋巴管主要是指腫瘤間質(zhì)內(nèi)淋巴管。 3.趨化因子受體CXCR4在原發(fā)性乳腺癌中的表達(dá)與VEGF-C的表達(dá)呈正相關(guān)。 4.C

12、XCR4的表達(dá)和腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分別受VEGF-C和趨化因子SDF-1的調(diào)控，VEGF-C/Flt-4-CXCR4/SDF-1生物鏈調(diào)節(jié)腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移既有淋巴管生成的參與，也有細(xì)胞趨化因子的作用，既反映了腫瘤細(xì)胞自身的特性，又證明了被轉(zhuǎn)移器官環(huán)境因素對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的作用，說(shuō)明腫瘤轉(zhuǎn)移是一個(gè)受多因素影響、多步驟的復(fù)雜過(guò)程。 5.上述研究結(jié)果提示，干預(yù)VEGF-C/Flt-4的表達(dá)或(和)CXCR4-SDF-1生物學(xué)軸的生物活性都有可能成