VEGF-D在淋巴管生成及乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中作用的研究.pdf

1、目的： 本研究通過(guò)觀察VEGF-D在乳腺癌組織中的表達(dá)以及對(duì)體外培養(yǎng)人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響，探討其與乳腺癌淋巴道轉(zhuǎn)移的關(guān)系以及可能的作用機(jī)制，同時(shí)比較VEGF-D與VEGF-C在乳腺癌淋巴管生成和淋巴道轉(zhuǎn)移中的作用。 材料與方法： 1.收集臨床手術(shù)切除、石蠟包埋的乳腺癌標(biāo)本112例、癌前病變標(biāo)本12例、正常乳腺組織標(biāo)本10例，制成5μm厚連續(xù)切片，進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色(SP法)，觀察乳腺癌組織中VEGF-D、

2、VEGF-C、LYVE-1、CD31的表達(dá)情況，并與臨床病理因素進(jìn)行對(duì)比分析。染色結(jié)果用SPSS11.0軟件包統(tǒng)計(jì)。 2.112例乳腺癌標(biāo)本中8例同時(shí)取其術(shù)后新鮮組織，采用RT-PCR方法檢測(cè)乳腺癌組織中VEGF-DmRNA的表達(dá)情況。 3.體外培養(yǎng)人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞。取生長(zhǎng)活力最旺盛的第3代細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為2×104/ml，加入96孔培養(yǎng)板，每孔100μl。實(shí)驗(yàn)分4組，每組6孔。細(xì)胞生長(zhǎng)24h后，每孔各加入以下試劑10

3、0μl/孔。第1組為對(duì)照組：ECM；第2組：ECM+rhVEGF-D；第3組：ECM+rhVEGF-C；第4組：ECM+rhVEGF-D+rhVEGF-C。72h后每孔加入MTT，繼續(xù)孵育4h，酶標(biāo)儀490nm波長(zhǎng)下測(cè)量每孔吸光度A值。以空白孔調(diào)零。實(shí)驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行3次。計(jì)算細(xì)胞增殖率，比較各組細(xì)胞增殖情況。 結(jié)果： 1.112例乳腺癌中有VEGF-D蛋白表達(dá)者85例(75.9％)，12例癌前病變中有VEGF-D蛋白表達(dá)4例

4、(30.0％)，10例正常乳腺組織中則未檢測(cè)到VEGF-D蛋白表達(dá)。VEGF-D蛋白在正常組織、癌前病變和腫瘤組織的表達(dá)依次增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(兩兩比較p＜0.05)。隨著腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)的增加，VEGF-D蛋白表達(dá)亦相應(yīng)增加，但VEGF-D蛋白表達(dá)與年齡因素?zé)o顯著相關(guān)。 2.112例乳腺癌中有VEGF-C蛋白表達(dá)者93例(83.0％)，高于VEGF-D蛋白的表達(dá)(75.9％)(p＜0.05)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率在VEGF-

5、C單獨(dú)表達(dá)組(7/13，53.8％)高于VEGF-D單獨(dú)表達(dá)組(2/5，40.0％)(p＜0.05)。 3.112例乳腺癌組織中，VEGF-D與VEGF-C同時(shí)表達(dá)者80例，同時(shí)無(wú)表達(dá)者14例，另有13例VEGF-C表達(dá)而VEGF-D不表達(dá)，5例VEGF-D表達(dá)而VEGF-C不表達(dá)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率在VEGF-D與VEGF-C同時(shí)表達(dá)組明顯高于二者單獨(dú)表達(dá)組或同時(shí)不表達(dá)組(p＜0.05)。 4.VEGF-D陽(yáng)性指數(shù)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)

6、移組(60.42±16.26)明顯高于未轉(zhuǎn)移組(41.82±15.93)(p＜0.05)。VEGF-C陽(yáng)性指數(shù)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(62.37±16.75)明顯高于未轉(zhuǎn)移組(43.56±15.64)(p＜0.05)。 5.乳腺癌組織淋巴管密度與VEGF-D、VEGF-C蛋白表達(dá)強(qiáng)度成正相關(guān)，隨著VEGF-D、VEGF-C蛋白表達(dá)強(qiáng)度的增加，淋巴管密度也增加(前者r=0.864，p＜0.05；后者r=0.870，p＜0.05)。乳腺癌組

7、織中淋巴管密度在VEGF-D、VEGF-C同時(shí)表達(dá)組顯著高于二者單獨(dú)表達(dá)組或同時(shí)不表達(dá)組。 6.乳腺癌組織淋巴管密度在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(13.72±7.74)明顯高于未轉(zhuǎn)移組(7.69±5.85)(p＜0.05)。 7.培養(yǎng)的人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞在加入rhVEGF-D、rhVEGF-C后均增殖活躍。培養(yǎng)72h后rhVEGF-D組增殖率為(53.8±7.07)％，rhVEGF-C組增殖率為(61.9±6.65)％，rhVEGF-D

8、+VEGF-C組增殖率為(76.1±5.08)％，均與對(duì)照組有顯著差別(p＜0.05)，各實(shí)驗(yàn)組間細(xì)胞增殖率均有明顯差別(兩兩比較p＜0.05)。 結(jié)論： 1.VEGF-D蛋白在乳腺癌組織中呈高表達(dá)，其表達(dá)強(qiáng)度與乳腺癌腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)密切相關(guān)，提示VEGF-D的高表達(dá)在乳腺癌進(jìn)展過(guò)程中起重要作用。 2.VEGF-D蛋白表達(dá)強(qiáng)度與乳腺癌組織淋巴管密度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，體外細(xì)胞培養(yǎng)證明rhVEGF-D可促進(jìn)人

9、淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，提示VEGF-D可通過(guò)促進(jìn)淋巴管生成而促進(jìn)乳腺癌的淋巴道轉(zhuǎn)移。 3.VEGF-D蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)率及其與乳腺癌淋巴管生成和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)性均小于VEGF-C，提示VEGF-C在乳腺癌組織中促進(jìn)淋巴管生成和淋巴道轉(zhuǎn)移的作用更強(qiáng)。 4.體外細(xì)胞培養(yǎng)證實(shí)，同時(shí)加入rhVEGF-D、rhVEGF-C的人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖率明顯高于單獨(dú)加入rhVEGF-D或rhVEGF-C組，免疫組化也顯示VEGF-