血清總IgE和特異性IgE魯米諾氧通道免疫分析方法的初步建立.pdf

1、目的:
　　由于過敏性疾病的發(fā)病率不斷升高，因此，建立有效的體外檢測手段對于過敏性疾病的預防和治療具有重要的意義。本研究主要是利用魯米諾氧通道免疫分析技術建立總IgE的定量檢測方法，并對所建立的方法進行方法學評價;在此基礎上，對該檢測體系進行改進，以中華絨螯蟹為例，采用魯米諾氧通道免疫分析技術建立血清特異性IgE的定量檢測方法，并對該反應體系基質、反應條件及反應模式進行摸索優(yōu)化。
　　方法:
　　1.總IgE檢測方法的

2、建立:將受體微球包被鼠抗人IgE單克隆抗體，兔抗人IgE多克隆抗體標記生物素，建立檢測總IgE的反應體系，并對所建立的方法進行方法學評價。
　　2.特異性IgE檢測方法的建立:提取中華絨螯蟹蛋白后標記生物素，以中華絨螯蟹為例，建立檢測特異性IgE的方法，并對所建立方法的反應時間、反應基質等分析條件進行優(yōu)化。
　　3.分析測定臨床標本未取得滿意結果原因:通過SDS-PAGE、斑點印跡等方法分別從生物素化蟹蛋白、受體微球等試劑方

3、面尋找未能成功檢測特異性IgE的原因。
　　結果:
　　1.總IgE方法學評價:本研究所建立方法的批內變異系數為3.33％-5.83％，批間變異系數為5.33％-9.40％;該方法的靈敏度為2.75IU/ml;回收率為98.11％-100.7％。通過檢測123例正常人血清總IgE值可知本實驗建立方法的正常人參考值上限為225IU/ml;干擾性分析中，溶血、黃疸及脂血的干擾率均＜10％;用本實驗建立的方法檢測30份臨床標本與B

4、eckman Coulter Immage800透射免疫比濁法的檢測結果具有良好的相關性，r=0.962。
　　2.所提取的中華絨螯蟹蛋白經SDS-PAGE電泳分析可知，蟹蛋白粗提液中清晰可見的主要蛋白有10條，其相對分子量分別為98 kD、85 kD、77 kD、55kD、48 kD、45 kD、39kD、36kD、33 kD;提取的蟹蛋白能夠與收集的蟹過敏患者血清反應，說明提取蟹蛋白具有免疫活性。
　　3.通過斑點印跡可

5、知，收集自醫(yī)院的陽性血清中含有特異性IgE;所提取蛋白經生物素化處理后仍具有免疫活性，但通過SDS-PAGE分析可知，生物素化蟹蛋白僅能夠在85kD和77kD處看到明顯條帶。
　　結論:
　　1.本研究中所建立的方法能夠用于定量檢測血清總IgE水平，且具有靈敏度強，準確性高，重復性好，便于操作等優(yōu)點，適用于臨床使用。
　　2.采用丙酮抽提法所提取蛋白成分基本完整，且具有免疫活性，可作為已知抗原用于檢測特異性IgE。