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1、目的:采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(FQ—PCR)方法檢測(cè)濕證大鼠及正常大鼠脾淋巴細(xì)胞T細(xì)胞受體可變區(qū)β(TCRVβ)基因譜表達(dá),尋找濕證有規(guī)律變化的TCRVβ亞家族基因表達(dá)譜。 方法:⑴實(shí)驗(yàn)對(duì)象健康SD大鼠,體重(230±10)g,雌性,由中山大學(xué)動(dòng)物中心提供。⑵法將大鼠32只隨機(jī)分為4組,每組8只,分別為正常組(常規(guī)飲食,自然環(huán)境)、內(nèi)濕組(高脂高糖飲食,自然環(huán)境)、外濕組(常規(guī)飲食,高濕環(huán)境),內(nèi)外濕組(高脂高糖飲食,高
2、濕環(huán)境)。觀察20天。⑶觀察指標(biāo)各組按隨機(jī)數(shù)字表選3只大鼠檢測(cè)其TCRVβ亞家族表達(dá)水平。 結(jié)果:①全組比較:TCRVβ1(F=32.637, P<0.001)、TCRVβ7(F=5.299, P<0.05)、TCRVβ9(F=7.283, P<0.05)、TCRVβ13(F=21.975, P<0.001)、TCRVβ18(F=10.508, P<0.01)表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②外濕組與正常組比較:TCRVβ1(P<0.0
3、01)、TCRVβ7(P<0.05)、TCRVβ9(P<0.01)、TCRVB10(P<0.05)、TCRVβ13(P<0.001)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;外濕組的上述TCRVβ譜系表達(dá)都比正常組高。③外濕組與內(nèi)濕組比較:TCRVβ1(P<0.001)、TCRVβ7(P<0.05)、TCRVβ12(P<0.05)、TCRVβ13(P<0.001)、TCRVβ18(P<0.05)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;外濕組的TCRVβ1、TCRVβ7、TCRVβ13、
4、TCRVβ18表達(dá)比內(nèi)濕組高,而外濕組的TCRvβ12表達(dá)比內(nèi)濕組低。④外濕組與內(nèi)外濕組比較:TCRVβ1(P<0.001)、TCRVβ7(P<0.01)、TCRVβ9(P<0.05)、TCRVβ10(P<0.05)、TCRVβ13(P<0.001)、TCRVβ18(P<0.01)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;外濕組的上述TCRVβ譜系表達(dá)都比內(nèi)外濕組高。⑤內(nèi)濕組與正常組比較:TCRvβ8(P<0.05)、TCRVβ9(P<0.05)、TCRVβ14
5、(P<0.05)、TCRVβ18(P<0.01)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;內(nèi)濕組的TCRVβ8、TCRVβ14、TCRVβ18表達(dá)比正常組低,而內(nèi)濕組的TCRVβ9表達(dá)比正常組高。⑥內(nèi)濕組與內(nèi)外濕組比較:只有TCRVβ17(P<0.05)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;內(nèi)濕組的TCRVβ17表達(dá)比內(nèi)外濕組高。⑦內(nèi)外濕組與正常組比較:TCRVβ8(P<0.05)、TCRVβ18(P<0.01)、TCRVβ19(P<0.05)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;內(nèi)外濕組的TCRVβ8、
6、TCRVβ18表達(dá)比正常組低,而內(nèi)外濕組的TCRVβ19表達(dá)比正常組高。 結(jié)論:⑴與正常組比較,實(shí)驗(yàn)組的TCRVβ亞家族表達(dá)紊亂,TCRVβ1、TCRVβ7、TCRVβ9、TCRVβ13、TCRVβ18表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在內(nèi)、外濕致病因素不同的刺激引起的TCRVβ相關(guān)亞家族的選擇性表達(dá)不一樣。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,所有內(nèi)濕、外濕、內(nèi)外濕大鼠出現(xiàn)不同程度出現(xiàn)濕邪致病的表現(xiàn)。⑵在外濕組多數(shù)TCRVβ亞家族比正常組表達(dá)升高,而內(nèi)濕組及內(nèi)外
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