建立SD大鼠痙攣型腦癱模型的研究.pdf

1、目的：目前，國內(nèi)外關(guān)于痙攣型腦癱動(dòng)物模型的建立方法的研究較多，但多缺乏模型制作的科學(xué)性，導(dǎo)致動(dòng)物模型癥狀不典型或癥狀持續(xù)時(shí)間較短，成為制約痙攣型腦癱模型深入研究的瓶頸，使得對(duì)痙攣型腦癱無法進(jìn)行系統(tǒng)而深入的研究。目前在實(shí)驗(yàn)研究中尚無一種理想的痙攣型腦癱模型可尋。本實(shí)驗(yàn)在以往研究的基礎(chǔ)上，通過改進(jìn)和創(chuàng)新，利用腦立體定位儀對(duì)大鼠進(jìn)行牢固的固定，并根據(jù)大鼠腦立體定位解剖圖譜，對(duì)大鼠的錐體束部位進(jìn)行精確的立體定位，通過微量注射器對(duì)大腦錐體束所在部

2、位注射無水乙醇造成錐體束壞死，最大程度的模擬了痙攣型腦癱的解剖學(xué)及病理改變，術(shù)后大鼠產(chǎn)生明顯的屈曲痙攣癥狀，且屈肌肌張力增高，癥狀和體征持續(xù)時(shí)間較長，穩(wěn)定性良好。從而建立出一種新的可復(fù)制性良好且痙攣持續(xù)時(shí)間較長的穩(wěn)定的大鼠痙攣型腦癱動(dòng)物模型，為進(jìn)一步深入的探究痙攣型腦癱的基礎(chǔ)研究和臨床診治打下基礎(chǔ)。
　　方法：選擇成年雄性SD大鼠16只，按隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為甲、乙、丙、丁四組，每組4只，甲、乙、丙組為實(shí)驗(yàn)組，丁組為對(duì)照組。將大

3、鼠用10％水合氯醛腹腔注射麻醉后固定于腦立體定位儀上，頭頂部剪毛備皮，常規(guī)消毒鋪單，采用顱頂后正中切口，長約2cm，逐層切開皮膚、皮下組織、深筋膜和骨膜，暴露前囟及矢狀縫，對(duì)照大鼠腦立體定位圖譜，選擇前囟后8.72mm，矢狀縫左側(cè)0.8mm，采用小型電鉆在顱頂上鉆孔，直徑約1mm，將微量注射器垂直向顱內(nèi)插入9.7mm。甲、乙、丙實(shí)驗(yàn)組大鼠分別向顱內(nèi)緩慢注射5μl、15μl、25μl無水乙醇，充分止血后，用少許骨蠟封住顱骨上的鉆孔，生理鹽

4、水沖洗后關(guān)閉創(chuàng)口。對(duì)照組大鼠微量注射器插入顱內(nèi)9.7mm后，不注射任何試劑，其余操作方法同實(shí)驗(yàn)組。術(shù)后詳細(xì)觀察對(duì)比三組實(shí)驗(yàn)組大鼠和對(duì)照組大鼠的癥狀及體征。待三組實(shí)驗(yàn)組大鼠癥狀穩(wěn)定后(約術(shù)后72小時(shí))，取癥狀最典型的一組中的一只大鼠，麻醉過程同制模過程，將大鼠置于無菌操作臺(tái)上，常規(guī)消毒、鋪單，先將大鼠顱頂傷口縫線拆開，清除傷口周圍及皮下血腫，按原切口方向分別向前延長切口至鼻尖，向后延長切口至頸部，暴露整個(gè)顱骨。用線鋸自眼眉部位橫行鋸開，通

5、過顳部向頭后鋸線在枕外隆突匯合。用峨眉鑿自眼眉部橫行鋸口撬開顱蓋骨，用小型咬骨剪在枕骨大孔將椎管剪開，分離脊髓。用顯微剪將嗅腦、視神經(jīng)剪斷，用尖刀探入蝶鞍分離腦垂體，連同腦垂體將整個(gè)大腦取出，用生理鹽水沖洗干凈后，放入福爾馬林溶液內(nèi)浸泡3天。將完整的大腦標(biāo)本做病理分析。其余大鼠均繼續(xù)正常飼養(yǎng)，每天密切觀察其性情和行為等生活情況以及痙攣狀態(tài)的主要觀察指標(biāo)，包括精神狀況、攝食及飲水情況、運(yùn)動(dòng)情況、肢體痙攣情況、肢體肌張力和癥狀持續(xù)的時(shí)間等。

6、
　　結(jié)果：甲組大鼠術(shù)后12小時(shí)內(nèi)，無任何主動(dòng)活動(dòng)及飲食，精神萎靡，右側(cè)肢體屈曲痙攣，屈肌肌張力較左側(cè)相比增大；術(shù)后24小時(shí)，有少量活動(dòng)及飲食，精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)，右側(cè)肢體屈曲痙攣狀態(tài)持續(xù)，主動(dòng)活動(dòng)及被動(dòng)驅(qū)趕時(shí)均呈順時(shí)針轉(zhuǎn)圈運(yùn)動(dòng)，轉(zhuǎn)圈直徑約60cm；術(shù)后48小時(shí)，大鼠飲食情況依然較正常組大鼠差，但主動(dòng)活動(dòng)增多，活動(dòng)及飲食增多，精神狀態(tài)持續(xù)好轉(zhuǎn)，屈曲痙攣癥狀持續(xù)；術(shù)后72小時(shí)，飲水及攝食漸趨正常，精神狀態(tài)接近正常，主動(dòng)活動(dòng)接近正常，右側(cè)肢

7、體屈曲痙攣癥狀已穩(wěn)定，屈曲痙攣狀態(tài)持續(xù)約6-8周。乙組大鼠術(shù)后18小時(shí)內(nèi)，無任何主動(dòng)活動(dòng)及飲食，精神萎靡，右側(cè)肢體明顯屈曲痙攣，屈肌肌張力較左側(cè)相比顯著增大；術(shù)后36小時(shí)，大鼠開始少量主動(dòng)攝食及飲水，有少量主動(dòng)活動(dòng)，精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)，運(yùn)動(dòng)時(shí)右側(cè)肢體跛行癥狀明顯，主動(dòng)活動(dòng)及被動(dòng)驅(qū)趕時(shí)均呈順時(shí)針轉(zhuǎn)圈運(yùn)動(dòng)，轉(zhuǎn)圈直徑約20cm，屈曲痙攣癥狀持續(xù)；術(shù)后48小時(shí)，大鼠飲食情況依然較正常組大鼠差，但主動(dòng)活動(dòng)增多，攝食及飲水增多，精神狀態(tài)持續(xù)好轉(zhuǎn)，屈曲痙攣

8、癥狀持續(xù)；術(shù)后72小時(shí)，飲水及攝食漸趨正常，精神狀態(tài)漸趨接近正常，主動(dòng)活動(dòng)接近正常，右側(cè)肢體屈曲痙攣癥狀已穩(wěn)定，屈曲痙攣狀態(tài)持續(xù)約8-14周。丙組大鼠術(shù)后24小時(shí)內(nèi)無任何主動(dòng)活動(dòng)及飲食，精神萎靡，右側(cè)肢體嚴(yán)重屈曲痙攣，屈肌肌張力較對(duì)側(cè)明顯增大，頭及整個(gè)身體偏向右側(cè)；術(shù)后48小時(shí)，仍無任何主動(dòng)活動(dòng)及飲食，精神極度萎靡，被動(dòng)驅(qū)趕僅能原地順時(shí)針方向打轉(zhuǎn)，且無法站立，頭及整個(gè)身體向右側(cè)嚴(yán)重傾斜，屈曲痙攣癥狀持續(xù)；術(shù)后72小時(shí)，精神極度萎靡，仍無

9、任何主動(dòng)活動(dòng)及飲食，身體消瘦明顯，屈曲痙攣癥狀持續(xù)；術(shù)后1周，因無法站立導(dǎo)致無法正常攝食及飲水，最終丙組大鼠全部死亡。丁組(對(duì)照組)大鼠術(shù)后24小時(shí)內(nèi)，活動(dòng)及飲食減少，精神狀態(tài)差，右側(cè)肢體無任何屈曲痙攣癥狀，兩側(cè)肢體屈肌肌張力相同，活動(dòng)均正常；術(shù)后48小時(shí)，精神狀態(tài)恢復(fù)可，漸趨正常活動(dòng)及飲食；術(shù)后72小時(shí)，完全恢復(fù)正?；顒?dòng)及飲食，精神狀態(tài)亦完全恢復(fù)。經(jīng)綜合對(duì)比各項(xiàng)觀察指標(biāo)，確定乙組大鼠癥狀和體征最典型。乙組大鼠大腦組織病理結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)

10、側(cè)大腦錐體束呈空洞樣壞死，且壞死部位及范圍準(zhǔn)確，僅破壞實(shí)驗(yàn)側(cè)錐體束，無傷及大腦其他任何組織。
　　結(jié)論：應(yīng)用本方法制作的大鼠痙攣性腦癱模型組術(shù)后肢體痙攣體征明顯，癥狀典型，持續(xù)時(shí)間較長，手術(shù)操作過程簡(jiǎn)單規(guī)范，定位準(zhǔn)確，并具有非常好的可重復(fù)性，病理結(jié)果更在形態(tài)學(xué)上進(jìn)一步證明了是大腦錐體束的壞死導(dǎo)致痙攣狀態(tài)的發(fā)生，由此可以進(jìn)一步對(duì)痙攣型腦癱進(jìn)行進(jìn)一步的深入研究。但該實(shí)驗(yàn)仍需要進(jìn)一步的完善和探究，模型制作過程中使用的化學(xué)消融劑(無水乙醇