蒙脫石-嗜酸乳桿菌復(fù)合物對炎癥性腸病模型大鼠的影響.pdf

1、本研究以蒙脫石(Diosmectite，DS)為載體固定嗜酸乳桿菌（Lactobacillusacidophilus，L.acidophilus），制備蒙脫石-嗜酸乳桿菌復(fù)合物(Diosmectite-Lactobacillus acidophilus,DS-L.acidophilus)，提高L.acidophilus在酸、膽鹽和高溫和模擬消化道的存活能力，研究DS-L.acidophilus對2，4，6三硝基苯磺酸（trinitro-

2、benzen-sulfonic acid, TNBS）誘導(dǎo)結(jié)腸炎模型大鼠緩解作用。
　　試驗(yàn)一 DS-L.acidophilus的制備和表征
　　制備了DS-L.acidophilus并研究了DS重量、L.acidophilus菌液起始濃度和菌液體積對吸附率的影響，優(yōu)化DS-L.acidophilus制備條件。通過X射線衍射(X-ray diffraction，XRD)、傅立葉變換紅外光譜(Fourier Transform

3、 infraredspectroscopy, FTIR)和掃描電子顯微鏡(Scanning Electron Microscope，SEM)對其進(jìn)行表征，研究其結(jié)構(gòu)表征變化情況。結(jié)果顯示，DS的層間距d001并未受到固定菌的影響，與DS原本的層間距無明顯差異，吸附過程并未影響DS的層間結(jié)構(gòu)。FTIR圖譜結(jié)果表明，在1037.82 cm-1處DS-L.acidophilus的Si-O伸縮振動(dòng)峰向著高能量遷移，1639.75 cm-1處H-

4、O-H的彎曲振動(dòng)峰向低能量移動(dòng)，1000～1700 cm-1處L.acidophilus特征吸收峰消失;DS與L.acidophilus表面的水分子之間通過形成氫鍵相互作用參與吸附過程。掃描電鏡觀察到，菌體固定在DS表面與黏土顆粒聚成團(tuán)。通過測定反應(yīng)體系的不同pH值、離子強(qiáng)度和溫度下的吸附率來探究DS與L.acidophilus的作用機(jī)理。結(jié)果表明，DS對L.acidophilus的吸附率隨著pH和離子強(qiáng)度的升高下降，隨溫度變化先升高后

5、降低，30℃時(shí)吸附率最高為50.75％。說明吸附過程受到菌體和蒙脫石表面特性和溫度環(huán)境條件等影響。
　　試驗(yàn)二 DS-L.acidophilus抗逆性和模擬消化道實(shí)驗(yàn)
　　研究了活菌濃度對數(shù)值log(CFU/mL)為8的三.acidophilus、DS和L.acidophilus混合物（DS+L.acidophilus）和DS-L.acidophilus在低pH(2.0，2.5，3.0)、不同膽鹽濃度(0.2，0.4，0.6

6、％)和高溫(50，80，100℃)下的L.acidophilus存活能力。結(jié)果顯示:在pH3.0、2.5和2.0條件下作用2h后，游離L.acidophilus活菌數(shù)對數(shù)值log(CFU/mL)分別為3.6、2和0.9，DS+L.acidophilus活菌數(shù)log(CFU/mL)分別為5.2、3.2和2.8，DS-L.acidophilus活菌數(shù)log(CFU/mL)分別為7、4.8和4.3;膽鹽濃度為0.0％、0.2％、0.4％和0.

7、6％條件下作用2h后，游離L.acidophilus活菌數(shù)對數(shù)值log(CFU/mL)分別為8.2、3.9、2.5和1.9，DS+L.acidophilus活菌數(shù)log(CFU/mL)分別為8.3、4.1、3.1和2.8，DS-L.acidophilus活菌數(shù)log(CFU/mL)分別為8.5、5.3、4.2和4;耐熱實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，溫度為50、80℃條件下作用15 min和100℃條件下作用10 min后，游離L.acidophilus

8、活菌數(shù)對數(shù)值log(CFU/mL)分別為5.8、3.2和1.8，DS+L.acidophilus活菌數(shù)log(CFU/mL)分別為6.5、3.9和2.2，DS-L.acidophilus活菌數(shù)log(CFU/mL)分別為7.1、4.8和2.8，隨著pH值降低、膽鹽濃度增加、溫度的升高和作用時(shí)間延長，L.acidophilus、DS+L.acidophilus和DS-L.acidophilus的L.acidophilus活菌數(shù)呈下降趨勢，

9、游離L.acidophilus活菌數(shù)下降最明顯，其次是DS+L.acidophilus，DS-L.acidophilus對低pH、膽鹽和高溫有一定耐受性。模擬消化道結(jié)果表明，經(jīng)模擬消化道處理后菌體存活率為L acidophilus＜ DS+L.acidophilus＜ DS-L.acidophilus(P＜0.05)?？梢奃S對菌體有一定的保護(hù)作用，但經(jīng)吸附作用固定后可更好的保護(hù)菌體，L.acidophilus存活能力更強(qiáng)。
　　

10、試驗(yàn)三 DS-L.acidophilus對炎癥性腸病模型大鼠的影響選取40只200±20 g的SD大鼠分為4組，每組10只大鼠:正常對照組(Control，Con)、2，4，6三硝基苯磺酸TNBS模型組(TNBS)、DS和L.acidophilus混合物組(DS+L.acidophilus)、DS和L.acidophilus復(fù)合物組(DS-L.acidophilus)。除Con組外，其余三組大鼠采用TNBS造模法制備炎癥性腸病大鼠模型。

11、造模成功后，DS+L.acidophilus組和DS-L.acidophilus組大鼠分別灌胃500 mg/kg的DS+L.acidophilus和DS-L.acidophilus，Con組和TNBS組灌胃等量生理鹽水，連續(xù)7天。于第8天大鼠禁食不禁水24小時(shí)后用10％水合氯醛麻醉取樣，利用Ussing Chamber測定結(jié)腸上皮電阻值(TER)和熒光素異硫氰酸酯-葡聚糖(FD4)通透性。測定大鼠血漿和結(jié)腸黏膜TNF-α、IL-6、IL

12、-1β，同時(shí)進(jìn)行疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)和病理肉眼損傷和組織學(xué)損傷評分，結(jié)果表明:與對照組相比，TNBS組大鼠DAI、結(jié)腸肉眼和組織學(xué)損傷評分顯著升高(P＜0.05)，結(jié)腸TER值下降(P＜o(jì).05)，F(xiàn)D4通透性升高(P＜0.05)，結(jié)腸黏膜SOD活力和GSH含量下降(P＜0.05)，MPO活力和MDA升高(P＜0.05)，血漿和結(jié)腸黏膜TNF-α、IL-1β和IL-6含量顯著升高(P＜0.05)，結(jié)腸黏膜MUC2，3，4和TFF3 m

13、RNA表達(dá)顯著下降（P＜0.05），DS+L.acidophilus和DS-L.acidophilus均可顯著降低(P＜0.05)DAI、結(jié)腸肉眼損傷評分和組織學(xué)損傷評分、FD4通透性和結(jié)腸MPO活性和血漿TNF-α、IL-1β和結(jié)腸黏膜TNF-α，IL-1β和IL-6的含量，以上指標(biāo)DS-L.acidophilus優(yōu)于DS+L.acidophilus。DS-L.acidophilus可增加(P＜0.05)結(jié)腸TER，降低結(jié)腸MDA和血