新型殼聚糖基組織工程角膜基質(zhì)支架的制備和性質(zhì)研究.pdf

1、目的：角膜基質(zhì)上部通過(guò)前彈力層與上皮層相連，下部通過(guò)后彈力層與內(nèi)皮層相連，占角膜厚度的90％，是角膜的主要構(gòu)成部分，對(duì)維持角膜的正常結(jié)構(gòu)和透明性至關(guān)重要。角膜基質(zhì)層由膠原纖維形成的板層規(guī)則的平行排列而成，基質(zhì)層的主要細(xì)胞是角膜基質(zhì)細(xì)胞。在當(dāng)前供體角膜來(lái)源少，角膜移植本身亦存在異體排斥反應(yīng)的情況下，尋找新的角膜來(lái)源成為重要的課題。角膜基質(zhì)的構(gòu)建是開展角膜組織工程的工作的前提。本論文采用生物來(lái)源的材料，包括羥丙基殼聚糖、明膠和硫酸軟骨素，利

2、用它們優(yōu)良的生物相容性和可生物降解性，構(gòu)成人工模擬的角膜基質(zhì)的支架材料。通過(guò)測(cè)定和比較這種材料與角膜相關(guān)的理化性質(zhì)，在細(xì)胞和組織水平檢驗(yàn)其生物相容性和可降解性，旨在全面驗(yàn)證其構(gòu)建組織工程角膜基質(zhì)的應(yīng)用前景。 方法：對(duì)兔角膜基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行原代和傳代培養(yǎng)，提供合適的細(xì)胞供材料研究使用。將羥丙基殼聚糖、明膠和硫酸軟骨素按不同比例混合后調(diào)pH值交聯(lián)，冷凍干燥處理后再加熱干燥，制成支架材料。對(duì)獲得的7組材料進(jìn)行細(xì)胞水平評(píng)價(jià)，篩選出最適合兔角

3、膜基質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)的一組。測(cè)定支架材料的透光率、含水量、通透性、力學(xué)性質(zhì)、結(jié)構(gòu)等理化性質(zhì)，進(jìn)一步運(yùn)用L929細(xì)胞采用MTT法評(píng)估其浸提液的細(xì)胞相容性，運(yùn)用CFSE-PI雙熒光染色觀察人角膜基質(zhì)細(xì)胞分布。在此期間，設(shè)定了含有和不含硫酸軟骨素的兩組材料，利用掃描電鏡和激光共聚焦掃描顯微鏡等對(duì)硫酸軟骨素(CS)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響進(jìn)行比較。組織水平的評(píng)價(jià)，采用大鼠肌肉、皮下植入，兔角膜板層囊袋植入三種方式進(jìn)行。對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)行日常護(hù)理觀察照相，定期進(jìn)行

4、組織切片的HE染色觀察。 結(jié)果：選擇原代和傳代1、2代細(xì)胞作為穩(wěn)定的細(xì)胞來(lái)源。利用光鏡和掃描電鏡觀察，篩選出了最適合兔角膜基質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)的材料組。掃描電鏡及HE染色顯示，材料的表面為片層狀相連，內(nèi)部結(jié)構(gòu)疏松。支架材料的在可見(jiàn)光范圍的透光率為83％-88％;含水量達(dá)到96％;對(duì)NaCl和葡萄糖均有良好的通透性；干濕態(tài)的抗張強(qiáng)度分別為1264KPa和31.4KPa，斷裂伸長(zhǎng)率分別為5.9％和11.0％。材料的浸提液對(duì)L929細(xì)胞無(wú)細(xì)胞